MAMP-ਪ੍ਰਾਪਤ ਰੱਖਿਆ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀ ਤਾਕਤ ਦਾ ਜੀਨੋਮ-ਵਿਆਪਕ ਐਸੋਸੀਏਸ਼ਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਅਤੇ ਸੋਰਘਮ ਵਿੱਚ ਪੱਤੇ ਦੇ ਨਿਸ਼ਾਨ ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਵਿਰੋਧ

ਪੌਦਾ ਅਤੇ ਜਰਾਸੀਮ ਸਮੱਗਰੀ

ਸੋਰਘਮ ਐਸੋਸਿਏਸ਼ਨ ਮੈਪਿੰਗ ਆਬਾਦੀ ਜਿਸਨੂੰ ਸੋਰਘਮ ਕਨਵਰਜ਼ਨ ਆਬਾਦੀ (SCP) ਵਜੋਂ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਡਾ. ਪੈਟ ਬ੍ਰਾਊਨ ਦੁਆਰਾ ਇਲੀਨੋਇਸ ਯੂਨੀਵਰਸਿਟੀ (ਹੁਣ UC ਡੇਵਿਸ ਵਿਖੇ) ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਹ ਪਹਿਲਾਂ ਵਰਣਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਅਤੇ ਯੂਐਸ ਵਾਤਾਵਰਣਾਂ ਵਿੱਚ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਅਤੇ ਵਿਕਾਸ ਦੀ ਸਹੂਲਤ ਲਈ ਫੋਟੋਪੀਰੀਓਡ-ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਛੋਟੇ ਕੱਦ ਵਿੱਚ ਬਦਲੀਆਂ ਵਿਭਿੰਨ ਲਾਈਨਾਂ ਦਾ ਸੰਗ੍ਰਹਿ ਹੈ।ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਇਸ ਆਬਾਦੀ ਵਿੱਚੋਂ 510 ਲਾਈਨਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਹਾਲਾਂਕਿ ਖਰਾਬ ਉਗਣ ਅਤੇ ਹੋਰ ਗੁਣਵੱਤਾ ਨਿਯੰਤਰਣ ਮੁੱਦਿਆਂ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਸਾਰੀਆਂ ਲਾਈਨਾਂ ਤਿੰਨੋਂ ਗੁਣਾਂ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ ਵਰਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ।ਆਖਰਕਾਰ 345 ਲਾਈਨਾਂ ਦੇ ਡੇਟਾ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਚੀਟਿਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ, 472 ਲਾਈਨਾਂ flg22 ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਲਈ, ਅਤੇ 456 TLS ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਬੀ. ਕੁਕੀਸਟ੍ਰੇਨ LSLP18 ਅਰਕਨਸਾਸ ਯੂਨੀਵਰਸਿਟੀ ਦੇ ਡਾ. ਬਰਟ ਬਲੂਹਮ ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।

MAMP ਜਵਾਬ ਮਾਪ

ਇਸ ਅਧਿਐਨ flg22, (Genscript catalog# RP19986), ਅਤੇ chitin ਵਿੱਚ ਦੋ ਵੱਖ-ਵੱਖ MAMPs ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਸੋਰਘਮ ਦੇ ਪੌਦੇ ਗ੍ਰੀਨਹਾਉਸ ਵਿੱਚ ਮਿੱਟੀ ਨਾਲ ਭਰੇ ਫਲੈਟਾਂ (33% ਸਨਸ਼ਾਈਨ ਰੇਡੀ-ਅਰਥ ਪ੍ਰੋ ਗ੍ਰੋਇੰਗ ਮਿਕਸ) ਉੱਤੇ ਰੱਖੇ ਇਨਸਰਟਸ ਵਿੱਚ ਉਗਾਏ ਗਏ ਸਨ।ਸੰਗ੍ਰਹਿ ਦੇ ਦਿਨ ਵਾਧੂ ਪੱਤਿਆਂ ਦੀ ਨਮੀ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ ਨਮੂਨਾ ਇਕੱਠਾ ਕਰਨ ਤੋਂ ਇੱਕ ਦਿਨ ਪਹਿਲਾਂ ਪੌਦਿਆਂ ਨੂੰ ਸਿੰਜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।

ਲਾਈਨਾਂ ਨੂੰ ਬੇਤਰਤੀਬ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ, ਲੌਜਿਸਟਿਕ ਕਾਰਨਾਂ ਕਰਕੇ, 60 ਲਾਈਨਾਂ ਦੇ ਬੈਚਾਂ ਵਿੱਚ ਲਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਹਰ ਲਾਈਨ ਲਈ, ਪ੍ਰਤੀ ਲਾਈਨ ਦੋ ਬੀਜਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਤਿੰਨ 'ਘੜੇ' ਲਗਾਏ ਗਏ ਸਨ।ਇਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਦੇ ਬੈਚ ਲਗਾਏ ਗਏ ਸਨ ਜਿਵੇਂ ਹੀ ਪਿਛਲੇ ਬੈਚ 'ਤੇ ਕਾਰਵਾਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਸਾਰੀ ਆਬਾਦੀ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਦੋ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਦੌੜਾਂ ਦੋਵਾਂ MAMPs ਲਈ ਦੋ ਰਨਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਹਰੇਕ ਵਿੱਚ ਜੀਨੋਟਾਈਪਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਰੀ-ਰੈਂਡਮਾਈਜ਼ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ।

ROS ਅਸੈਸ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, ਹਰੇਕ ਲਾਈਨ ਲਈ, ਛੇ ਬੀਜ 3 ਵੱਖ-ਵੱਖ ਬਰਤਨਾਂ ਵਿੱਚ ਲਗਾਏ ਗਏ ਸਨ।ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਬੀਜਾਂ ਵਿੱਚੋਂ, ਤਿੰਨ ਨੂੰ ਇਕਸਾਰਤਾ ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੇ ਚੁਣਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਬੀਜ ਜੋ ਅਸਾਧਾਰਨ ਦਿਖਾਈ ਦਿੰਦੇ ਸਨ ਜਾਂ ਬਹੁਗਿਣਤੀ ਨਾਲੋਂ ਕਾਫ਼ੀ ਲੰਬੇ ਜਾਂ ਛੋਟੇ ਸਨ, ਵਰਤੇ ਨਹੀਂ ਗਏ ਸਨ।ਤਿੰਨ ਵੱਖ-ਵੱਖ 15-ਦਿਨ ਪੁਰਾਣੇ ਸੋਰਘਮ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਚੌਥੇ ਪੱਤੇ ਦੇ ਚੌਥੇ ਹਿੱਸੇ ਤੋਂ 3 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਵਿਆਸ ਵਾਲੇ ਚਾਰ ਪੱਤਿਆਂ ਦੀਆਂ ਡਿਸਕਾਂ ਨੂੰ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਦੋ ਪੌਦਿਆਂ ਤੋਂ ਪ੍ਰਤੀ ਪੱਤਾ ਇੱਕ ਡਿਸਕ ਅਤੇ ਇੱਕ ਪੌਦੇ ਤੋਂ ਦੋ ਡਿਸਕ, ਦੂਜੀ ਡਿਸਕ ਪਾਣੀ ਦਾ ਕੰਟਰੋਲ ਬਣ ਜਾਂਦੀ ਹੈ (ਹੇਠਾਂ ਦੇਖੋ)।ਡਿਸਕਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਕਾਲੇ 96-ਵੈਲ ਪਲੇਟ ਵਿੱਚ 50 μl H20 'ਤੇ ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਤੈਰਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਰੌਸ਼ਨੀ ਦੇ ਸੰਪਰਕ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ ਇੱਕ ਅਲਮੀਨੀਅਮ ਦੀ ਮੋਹਰ ਨਾਲ ਸੀਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਰਾਤ ਭਰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਅਗਲੀ ਸਵੇਰ 2 mg/ml chemiluminescent probe L-012 (Wako, catalog # 120-04891), 2 mg/ml horseradish peroxidase (Type VI-A, Sigma-Aldrich, catalog # P6782), ਅਤੇ ਵਰਤ ਕੇ ਇੱਕ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਹੱਲ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ। 100 mg/ml Chitin ਜਾਂ Flg22 ਦਾ 2 μM।ਇਸ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਘੋਲ ਦਾ 50 µl ਚਾਰ ਖੂਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਤਿੰਨ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਚੌਥਾ ਖੂਹ ਇੱਕ ਨਕਲੀ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸੀ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ MAMP ਨੂੰ ਛੱਡ ਕੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਹੱਲ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਹਰ ਥਾਲੀ ਵਿੱਚ ਸਿਰਫ਼ ਪਾਣੀ ਵਾਲੇ ਚਾਰ ਖਾਲੀ ਖੂਹ ਵੀ ਸ਼ਾਮਲ ਸਨ।

ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਘੋਲ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, 1 ਘੰਟੇ ਲਈ ਹਰ 2 ਮਿੰਟ ਵਿੱਚ SynergyTM 2 ਮਲਟੀ-ਡਿਟੈਕਸ਼ਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਰੀਡਰ (BioTek) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਲੂਮਿਨਿਸੈਂਸ ਨੂੰ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ।ਪਲੇਟ ਰੀਡਰ ਇਸ 1 ਘੰਟੇ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਹਰ 2 ਮਿੰਟ ਵਿੱਚ ਲੂਮਿਨਿਸੈਂਸ ਮਾਪ ਲੈਂਦਾ ਹੈ।ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਲਈ ਮੁੱਲ ਦੇਣ ਲਈ ਸਾਰੀਆਂ 31 ਰੀਡਿੰਗਾਂ ਦੇ ਜੋੜ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਹਰੇਕ ਜੀਨੋਟਾਈਪ ਲਈ MAMP ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਲਈ ਅਨੁਮਾਨਿਤ ਮੁੱਲ (ਤਿੰਨ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਖੂਹਾਂ ਦਾ ਔਸਤ ਲੂਮਿਨਸੈਂਸ ਮੁੱਲ — ਮੌਕ ਖੂਹ ਦਾ ਮੁੱਲ) - ਘਟਾਓ ਔਸਤ ਖਾਲੀ ਖੂਹ ਮੁੱਲ।ਖਾਲੀ ਖੂਹ ਦੇ ਮੁੱਲ ਲਗਾਤਾਰ ਜ਼ੀਰੋ ਦੇ ਨੇੜੇ ਸਨ।

ਦੀ ਲੀਫ ਡਿਸਕਸਨਿਕੋਟੀਆਨਾ ਬੇਂਥਾਮੀਆਨਾ, ਇੱਕ ਉੱਚ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਸੋਰਘਮ ਲਾਈਨ (SC0003), ਅਤੇ ਇੱਕ ਘੱਟ ਜਵਾਬਦੇਹ ਸੋਰਘਮ ਲਾਈਨ (PI 6069) ਨੂੰ ਵੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਨਿਯੰਤਰਣ ਦੇ ਉਦੇਸ਼ਾਂ ਲਈ ਹਰੇਕ 96-ਵੈਲ ਪਲੇਟ ਵਿੱਚ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।

ਬੀ. ਕੁਕੀinoculum ਦੀ ਤਿਆਰੀ ਅਤੇ ਟੀਕਾਕਰਨ

ਬੀ. ਕੁਕੀinoculum ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸੇ ਅਨੁਸਾਰ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, ਸੋਰਘਮ ਦੇ ਦਾਣਿਆਂ ਨੂੰ ਤਿੰਨ ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਭਿੱਜਿਆ ਗਿਆ, ਕੁਰਲੀ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, 1L ਕੋਨਿਕਲ ਫਲਾਸਕ ਵਿੱਚ ਸਕੂਪ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ 15psi ਅਤੇ 121 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਇੱਕ ਘੰਟੇ ਲਈ ਆਟੋਕਲੇਵ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।ਫਿਰ ਦਾਣਿਆਂ ਨੂੰ ਤਾਜ਼ੇ ਕਲਚਰ ਤੋਂ ਲਗਭਗ 5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਮੈਸੇਰੇਟਿਡ ਮਾਈਸੀਲੀਆ ਨਾਲ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਬੀ. ਕੁਕੀLSLP18 ਅਲੱਗ-ਥਲੱਗ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 2 ਹਫ਼ਤਿਆਂ ਲਈ ਛੱਡ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਹਰ 3 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ ਫਲਾਸਕ ਨੂੰ ਹਿਲਾ ਕੇ।2 ਹਫ਼ਤਿਆਂ ਬਾਅਦ, ਉੱਲੀਮਾਰ ਨਾਲ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਸੋਰਘਮ ਦੇ ਦਾਣਿਆਂ ਨੂੰ ਹਵਾ ਵਿੱਚ ਸੁਕਾ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਫਿਰ ਖੇਤ ਵਿੱਚ ਟੀਕਾ ਲਗਾਉਣ ਤੱਕ 4 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਪੂਰੇ ਅਜ਼ਮਾਇਸ਼ ਲਈ ਇੱਕੋ inoculum ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਹਰ ਸਾਲ ਤਾਜ਼ਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ.ਟੀਕਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ, 6-10 ਸੰਕਰਮਿਤ ਅਨਾਜ 4-5 ਹਫ਼ਤੇ ਪੁਰਾਣੇ ਸੋਰਘਮ ਦੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਹਿੜੇ ਵਿੱਚ ਰੱਖੇ ਗਏ ਸਨ।ਇਹਨਾਂ ਉੱਲੀ ਤੋਂ ਪੈਦਾ ਹੋਏ ਬੀਜਾਣੂਆਂ ਨੇ ਇੱਕ ਹਫ਼ਤੇ ਦੇ ਅੰਦਰ ਜੁਆਰ ਦੇ ਛੋਟੇ ਪੌਦਿਆਂ ਵਿੱਚ ਲਾਗ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰ ਦਿੱਤੀ।

ਬੀਜ ਦੀ ਤਿਆਰੀ

ਖੇਤ ਵਿੱਚ ਬੀਜਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਸੋਰਘਮ ਦੇ ਬੀਜ ਨੂੰ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕ, ਕੀਟਨਾਸ਼ਕ ਅਤੇ ਸੇਫਨਰ ਮਿਸ਼ਰਣ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ~ 1% ਸਪੀਰਾਟੋ 480 ਐਫਐਸ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕ, 4% ਸੇਬਰਿੰਗ 480 ਐਫਐਸ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕ, 3% ਸੋਰਪਰੋ 940 ਈਐਸ ਬੀਜ ਸੇਫਨਰ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਫਿਰ ਬੀਜਾਂ ਨੂੰ 3 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਹਵਾ ਨਾਲ ਸੁਕਾਇਆ ਗਿਆ ਜਿਸ ਨਾਲ ਬੀਜਾਂ ਦੇ ਆਲੇ ਦੁਆਲੇ ਇਸ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੀ ਪਤਲੀ ਪਰਤ ਹੋ ਗਈ।ਸੇਫਨਰ ਨੇ ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਦੇ ਦੋਹਰੇ ਮੈਗਨਮ ਨੂੰ ਪੂਰਵ-ਉਭਰਨ ਦੇ ਇਲਾਜ ਵਜੋਂ ਵਰਤਣ ਦੀ ਇਜਾਜ਼ਤ ਦਿੱਤੀ।

ਟਾਰਗੇਟ ਲੀਫ ਸਪਾਟ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ

SCP ਨੂੰ 14-15 ਜੂਨ 2017 ਅਤੇ ਜੂਨ 20, 2018 ਨੂੰ ਕਲੇਟਨ, NC ਵਿੱਚ ਕੇਂਦਰੀ ਫਸਲ ਖੋਜ ਸਟੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਹਰ ਇੱਕ ਕੇਸ ਵਿੱਚ ਦੋ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਬੇਤਰਤੀਬੇ ਸੰਪੂਰਨ ਬਲਾਕ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਵਿੱਚ ਲਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।10 ਬੀਜ ਪ੍ਰਤੀ ਪਲਾਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ 0.9 ਮੀਟਰ ਕਤਾਰ ਚੌੜਾਈ ਦੇ ਨਾਲ 1.8 ਮੀਟਰ ਸਿੰਗਲ ਕਤਾਰਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਯੋਗ ਲਗਾਏ ਗਏ ਸਨ।ਕਿਨਾਰੇ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਹਰੇਕ ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੇ ਘੇਰੇ ਦੇ ਦੁਆਲੇ ਦੋ ਬਾਰਡਰ ਕਤਾਰਾਂ ਲਗਾਈਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ।ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੂੰ 20 ਜੁਲਾਈ, 2017 ਅਤੇ 20 ਜੁਲਾਈ, 2018 ਨੂੰ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਸ ਸਮੇਂ ਸੋਰਘਮ ਦੇ ਪੌਦੇ ਵਿਕਾਸ ਦੇ ਪੜਾਅ 3 'ਤੇ ਸਨ। ਰੇਟਿੰਗਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਤੋਂ ਨੌਂ ਸਕੇਲਾਂ 'ਤੇ ਲਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿੱਥੇ ਬਿਮਾਰੀ ਦੇ ਕੋਈ ਲੱਛਣ ਨਾ ਦਿਖਾਉਣ ਵਾਲੇ ਪੌਦਿਆਂ ਨੂੰ 9 ਅਤੇ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਨਾਲ ਅੰਕ ਦਿੱਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਮਰੇ ਹੋਏ ਪੌਦਿਆਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਵਜੋਂ ਅੰਕਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।2017 ਵਿੱਚ ਦੋ ਰੇਟਿੰਗਾਂ ਲਈਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ ਅਤੇ 2018 ਵਿੱਚ ਚਾਰ ਰੀਡਿੰਗਾਂ ਹਰ ਸਾਲ ਟੀਕਾਕਰਨ ਤੋਂ ਦੋ ਹਫ਼ਤਿਆਂ ਬਾਅਦ ਸ਼ੁਰੂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ।sAUDPC (ਰੋਗ ਪ੍ਰਗਤੀ ਕਰਵ ਦੇ ਅਧੀਨ ਮਿਆਰੀ ਖੇਤਰ) ਦੀ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।