ਐਂਥਲਮਿੰਟਿਕ ਦਵਾਈ N,N-ਡਾਈਥਾਈਲ-ਐਮ-ਟੋਲੂਆਮਾਈਡ (ਡੀਈਈਟੀ) ਨੂੰ ACHE (ਐਸੀਟਿਲਕੋਲੀਨੇਸਟਰੇਸ) ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ ਅਤੇ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਨਾੜੀਕਰਨ ਦੇ ਕਾਰਨ ਸੰਭਾਵੀ ਕਾਰਸੀਨੋਜਨਿਕ ਗੁਣ ਹਨ। ਇਸ ਪੇਪਰ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਾਂ ਕਿ DEET ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਐਂਡੋਥੈਲੀਅਲ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਐਂਜੀਓਜੇਨੇਸਿਸ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਟਿਊਮਰ ਦਾ ਵਾਧਾ ਵਧਦਾ ਹੈ। DEET ਐਂਜੀਓਜੇਨੇਸਿਸ ਵੱਲ ਲੈ ਜਾਣ ਵਾਲੀਆਂ ਸੈਲੂਲਰ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਸਾਰ, ਮਾਈਗ੍ਰੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਅਡੈਸ਼ਨ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। ਇਹ ਐਂਡੋਥੈਲੀਅਲ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਵਧੇ ਹੋਏ NO ਉਤਪਾਦਨ ਅਤੇ VEGF ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ। M3 ਨੂੰ ਚੁੱਪ ਕਰਨ ਜਾਂ ਫਾਰਮਾਕੋਲੋਜੀਕਲ M3 ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਨਾਲ ਇਹਨਾਂ ਸਾਰੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਜੋ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ DEET-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਐਂਜੀਓਜੇਨੇਸਿਸ M3-ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਹੈ। ਐਂਡੋਥੈਲੀਅਲ ਅਤੇ HEK ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਕੈਲਸ਼ੀਅਮ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰਯੋਗ M3 ਰੀਸੈਪਟਰਾਂ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ਬਾਈਡਿੰਗ ਅਤੇ ਡੌਕਿੰਗ ਅਧਿਐਨ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ DEET M3 ਰੀਸੈਪਟਰਾਂ ਦੇ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਮੋਡਿਊਲੇਟਰ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, DEET AChE ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਐਸੀਟਿਲਕੋਲੀਨ ਦੀ ਜੈਵ-ਉਪਲਬਧਤਾ ਅਤੇ M3 ਰੀਸੈਪਟਰਾਂ ਨਾਲ ਇਸਦੀ ਬਾਈਡਿੰਗ ਵਧਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਨਿਯਮਨ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰੋਐਂਗਿਓਜੇਨਿਕ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ECs ਨੂੰ ਸਵਿਸ ਚੂਹਿਆਂ ਦੀ ਏਓਰਟਾ ਤੋਂ ਅਲੱਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਕੱਢਣ ਦਾ ਤਰੀਕਾ ਕੋਬਾਯਾਸ਼ੀ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ 26 ਤੋਂ ਅਪਣਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਮੂਰੀਨ ECs ਨੂੰ EBM-2 ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜੋ ਚੌਥੇ ਪਾਸ ਤੱਕ 5% ਗਰਮੀ-ਨਿਰਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ FBS ਨਾਲ ਪੂਰਕ ਸੀ।
HUVEC, U87MG, ਜਾਂ BF16F10 ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰ 'ਤੇ DEET ਦੇ ਦੋ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ CyQUANT ਸੈੱਲ ਪ੍ਰੋਲਿਫਰੇਸ਼ਨ ਅਸੇ ਕਿੱਟ (ਮੌਲੀਕੂਲਰ ਪ੍ਰੋਬਸ, C7026) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, ਪ੍ਰਤੀ ਖੂਹ 5.103 ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ 96-ਖੂਹ ਪਲੇਟ ਵਿੱਚ ਸੀਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਰਾਤ ਭਰ ਜੁੜਨ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ, ਅਤੇ ਫਿਰ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ DEET ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਵਿਕਾਸ ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਦੇ ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ ਡਾਈ ਬਾਈਡਿੰਗ ਘੋਲ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ ਅਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ 30 ਮਿੰਟ ਲਈ 37 °C 'ਤੇ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕਰੋ। ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਪੱਧਰਾਂ ਨੂੰ 485 nm ਐਕਸਾਈਟੇਸ਼ਨ ਫਿਲਟਰਾਂ ਅਤੇ 530 nm ਐਮੀਸ਼ਨ ਫਿਲਟਰਾਂ ਨਾਲ ਲੈਸ ਮਿਥਰਾਸ LB940 ਮਲਟੀਮੋਡ ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਰੀਡਰ (ਬਰਥੋਲਡ ਟੈਕਨਾਲੋਜੀਜ਼, ਬੈਡ ਵਾਈਲਡਬੈਡ, ਜਰਮਨੀ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
HUVEC ਨੂੰ 96-ਖੂਹ ਪਲੇਟਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀ ਖੂਹ 104 ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਘਣਤਾ 'ਤੇ ਸੀਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ DEET ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇੱਕ ਕਲੋਰੀਮੈਟ੍ਰਿਕ MTT ਅਸੇ (ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ, M5655) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸੈੱਲ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। 570 nm ਦੀ ਤਰੰਗ-ਲੰਬਾਈ 'ਤੇ ਇੱਕ ਮਲਟੀਮੋਡ ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਰੀਡਰ (ਮਿਥਰਾਸ LB940) 'ਤੇ ਆਪਟੀਕਲ ਘਣਤਾ ਮੁੱਲ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।
DEET ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਐਂਜੀਓਜੇਨੇਸਿਸ ਅਸੈਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। 10-8 M ਜਾਂ 10-5 M DEET ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਨੇ HUVECs ਵਿੱਚ ਕੇਸ਼ਿਕਾ ਲੰਬਾਈ ਦੇ ਗਠਨ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ (ਚਿੱਤਰ 1a, b, ਚਿੱਟੀਆਂ ਪੱਟੀਆਂ)। ਕੰਟਰੋਲ ਸਮੂਹ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, 10-14 ਤੋਂ 10-5 M ਤੱਕ DEET ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਾਲੇ ਇਲਾਜ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਕੇਸ਼ਿਕਾ ਲੰਬਾਈ 10-8 M DEET (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ S2) 'ਤੇ ਇੱਕ ਪਠਾਰ 'ਤੇ ਪਹੁੰਚ ਗਈ। 10-8 M ਅਤੇ 10-5 M ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ DEET ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ HUVECs ਦੇ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਪ੍ਰੋਐਂਗਿਓਜੇਨਿਕ ਪ੍ਰਭਾਵ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਨਹੀਂ ਪਾਇਆ ਗਿਆ।
ਨਿਓਵੈਸਕੁਲਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ 'ਤੇ DEET ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਇਨ ਵੀਵੋ ਨਿਓਵੈਸਕੁਲਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਅਧਿਐਨ ਕੀਤੇ। 14 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ, 10-8 M ਜਾਂ 10-5 M DEET ਨਾਲ ਪ੍ਰੀਕਲਚਰ ਕੀਤੇ ਐਂਡੋਥੈਲੀਅਲ ਸੈੱਲਾਂ ਨਾਲ ਟੀਕਾ ਲਗਾਏ ਗਏ ਚੂਹਿਆਂ ਨੇ ਹੀਮੋਗਲੋਬਿਨ ਸਮੱਗਰੀ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਵਾਧਾ ਦਿਖਾਇਆ (ਚਿੱਤਰ 1c, ਚਿੱਟੀਆਂ ਪੱਟੀਆਂ)।
ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, DEET-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਨਿਓਵੈਸਕੁਲਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਦਾ ਅਧਿਐਨ U87MG ਜ਼ੈਨੋਗ੍ਰਾਫਟ-ਬੇਅਰਿੰਗ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ DEET ਨਾਲ ਰੋਜ਼ਾਨਾ (ip) ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਸੀ ਜੋ 10-5 M ਦੀ ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਜਾਣੀ ਜਾਂਦੀ ਖੁਰਾਕ 'ਤੇ ਸੀ, ਜੋ ਕਿ ਸੰਪਰਕ ਵਿੱਚ ਆਏ ਮਨੁੱਖਾਂ ਵਿੱਚ ਆਮ ਹੈ। 23 ਵਿੱਚ। U87MG ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ ਟੀਕਾ ਲਗਾਉਣ ਤੋਂ 14 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ ਖੋਜਣਯੋਗ ਟਿਊਮਰ (ਭਾਵ ਟਿਊਮਰ >100 mm3) ਦੇਖੇ ਗਏ। 28ਵੇਂ ਦਿਨ, DEET-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ ਕੰਟਰੋਲ ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਵਾਧੇ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਵਾਧਾ ਹੋਇਆ (ਚਿੱਤਰ 1d, ਵਰਗ)। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਟਿਊਮਰਾਂ ਦੇ CD31 ਸਟੈਨਿੰਗ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ DEET ਨੇ ਕੇਸ਼ਿਕਾ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਵਾਧਾ ਕੀਤਾ ਪਰ ਮਾਈਕ੍ਰੋਵੇਸਲ ਘਣਤਾ ਨਹੀਂ। (ਚਿੱਤਰ 1e–g)।
DETA-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਪ੍ਰਸਾਰ ਵਿੱਚ ਮਸਕਰੀਨਿਕ ਰੀਸੈਪਟਰਾਂ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ, pFHHSiD (10-7 M, ਇੱਕ ਚੋਣਵੇਂ M3 ਰੀਸੈਪਟਰ ਵਿਰੋਧੀ) ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ 10-8 M ਜਾਂ 10-5 M DETA ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। HUVEC ਦਾ ਇਲਾਜ। pFHHSiD ਨੇ ਸਾਰੀਆਂ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣਾਂ 'ਤੇ DETA ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰਕ ਗੁਣਾਂ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਰੋਕ ਦਿੱਤਾ (ਸਾਰਣੀ 1)।
ਇਹਨਾਂ ਹਾਲਤਾਂ ਦੇ ਤਹਿਤ, ਅਸੀਂ ਇਹ ਵੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਕਿ ਕੀ DEET HUVEC ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਕੇਸ਼ਿਕਾ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਵਧਾਏਗਾ। ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ, pFHHSiD ਨੇ DEET-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕੇਸ਼ਿਕਾ ਦੀ ਲੰਬਾਈ (ਚਿੱਤਰ 1a, b, ਸਲੇਟੀ ਬਾਰ) ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਹੱਦ ਤੱਕ ਰੋਕਿਆ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, M3 siRNA ਨਾਲ ਵੀ ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਹਾਲਾਂਕਿ ਕੰਟਰੋਲ siRNA ਕੇਸ਼ਿਕਾ ਦੇ ਗਠਨ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਨਹੀਂ ਸੀ, M3 ਮਸਕਰੀਨਿਕ ਰੀਸੈਪਟਰ ਨੂੰ ਚੁੱਪ ਕਰਾਉਣ ਨਾਲ DEET ਦੀ ਕੇਸ਼ਿਕਾ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਵਧਾਉਣ ਦੀ ਯੋਗਤਾ ਖਤਮ ਹੋ ਗਈ (ਚਿੱਤਰ 1a, b, ਕਾਲੀ ਬਾਰ)।
ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, 10-8 M ਜਾਂ 10-5 M DEET-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਵੈਸਕੁਲਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਅਤੇ ਨਿਓਵੈਸਕੁਲਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਇਨ ਵਿਵੋ ਦੋਵੇਂ pFHHSiD ਦੁਆਰਾ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਬਲੌਕ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ (ਚਿੱਤਰ 1c, d, ਚੱਕਰ)। ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ DEET ਚੋਣਵੇਂ M3 ਰੀਸੈਪਟਰ ਵਿਰੋਧੀਆਂ ਜਾਂ M3 siRNA ਪ੍ਰਤੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਰਸਤੇ ਰਾਹੀਂ ਐਂਜੀਓਜੇਨੇਸਿਸ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।
AChE DEET ਦਾ ਅਣੂ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਹੈ। ਡੋਨੇਪੇਜ਼ਿਲ ਵਰਗੀਆਂ ਦਵਾਈਆਂ, ਜੋ AChE ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ, ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਅਤੇ ਮਾਊਸ ਹਿੰਡਲਿਮਬ ਇਸਕੇਮੀਆ ਮਾਡਲਾਂ14 ਵਿੱਚ EC ਐਂਜੀਓਜੇਨੇਸਿਸ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ। ਅਸੀਂ HUVEC ਵਿੱਚ AChE ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਗਤੀਵਿਧੀ 'ਤੇ DEET ਦੀਆਂ ਦੋ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ। DEET ਦੀ ਘੱਟ (10-8 M) ਅਤੇ ਉੱਚ (10-5 M) ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੇ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਐਂਡੋਥੈਲੀਅਲ AChE ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਘਟਾਇਆ (ਚਿੱਤਰ 2)।
DEET (10-8 M ਅਤੇ 10-5 M) ਦੀਆਂ ਦੋਵੇਂ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣਾਂ ਨੇ HUVEC 'ਤੇ ਐਸੀਟਿਲਕੋਲੀਨੇਸਟਰੇਸ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ। BW284c51 (10-5 M) ਨੂੰ ਐਸੀਟਿਲਕੋਲੀਨੇਸਟਰੇਸ ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ ਲਈ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਨਤੀਜੇ ਵਾਹਨ-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ DEET ਦੀਆਂ ਦੋ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣਾਂ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ HUVEC 'ਤੇ AChE ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਵਜੋਂ ਦਰਸਾਏ ਗਏ ਹਨ। ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ ਛੇ ਸੁਤੰਤਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਦੇ ਔਸਤ ± SEM ਵਜੋਂ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। *p < 0.05 ਨਿਯੰਤਰਣ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ (ਕ੍ਰਸਕਲ-ਵਾਲਿਸ ਅਤੇ ਡਨ ਮਲਟੀਪਲ ਤੁਲਨਾ ਟੈਸਟ)।
ਨਾਈਟ੍ਰਿਕ ਆਕਸਾਈਡ (NO) ਐਂਜੀਓਜੈਨਿਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ 33 ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ, DEET-ਉਤੇਜਿਤ HUVECs ਵਿੱਚ NO ਉਤਪਾਦਨ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। DEET-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਐਂਡੋਥੈਲੀਅਲ NO ਉਤਪਾਦਨ ਨੂੰ ਕੰਟਰੋਲ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਵਧਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਪਰ ਸਿਰਫ 10-8 M (ਚਿੱਤਰ 3c) ਦੀ ਖੁਰਾਕ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। DEET-ਪ੍ਰੇਰਿਤ NO ਉਤਪਾਦਨ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਅਣੂ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ, eNOS ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਅਤੇ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਪੱਛਮੀ ਬਲੋਟਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਹਾਲਾਂਕਿ DEET ਇਲਾਜ ਨੇ eNOS ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਨਹੀਂ ਬਦਲਿਆ, ਇਸਨੇ eNOS ਫਾਸਫੋਰੀਲੇਸ਼ਨ (ਚਿੱਤਰ 3d) ਵਿੱਚ ਇਲਾਜ ਨਾ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਇਸਦੀ ਰੋਕਥਾਮ ਵਾਲੀ ਸਾਈਟ (Thr-495) ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦੇ ਹੋਏ ਇਸਦੀ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਸਾਈਟ (Ser-1177) 'ਤੇ eNOS ਫਾਸਫੋਰੀਲੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਵਾਧਾ ਕੀਤਾ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਸਾਈਟ ਅਤੇ ਰੋਕਥਾਮ ਵਾਲੀ ਸਾਈਟ 'ਤੇ ਫਾਸਫੋਰੀਲੇਟਿਡ eNOS ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਦੀ ਗਣਨਾ ਫਾਸਫੋਰੀਲੇਟਿਡ eNOS ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਕੁੱਲ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਆਮ ਬਣਾਉਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਇਹ ਅਨੁਪਾਤ ਇਲਾਜ ਨਾ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸੈੱਲਾਂ (ਚਿੱਤਰ 3d) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ DEET ਦੀ ਹਰੇਕ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ HUVECs ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਵਾਧਾ ਹੋਇਆ ਸੀ।
ਅੰਤ ਵਿੱਚ, VEGF ਦੀ ਸਮੀਕਰਨ, ਜੋ ਕਿ ਮੁੱਖ ਪ੍ਰੋਐਂਜੀਓਜੇਨਿਕ ਕਾਰਕਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਹੈ, ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਪੱਛਮੀ ਬਲੋਟਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। DEET ਨੇ VEGF ਸਮੀਕਰਨ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਵਧਾ ਦਿੱਤਾ, ਜਦੋਂ ਕਿ pFHHSiD ਨੇ ਇਸ ਸਮੀਕਰਨ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਬਲੌਕ ਕਰ ਦਿੱਤਾ।
ਕਿਉਂਕਿ DEET ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ M3 ਰੀਸੈਪਟਰਾਂ ਦੇ ਫਾਰਮਾਕੋਲੋਜੀਕਲ ਨਾਕਾਬੰਦੀ ਅਤੇ ਡਾਊਨਰੇਗੂਲੇਸ਼ਨ ਦੋਵਾਂ ਪ੍ਰਤੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਹਨ, ਅਸੀਂ ਇਸ ਪਰਿਕਲਪਨਾ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਕਿ DEET ਕੈਲਸ਼ੀਅਮ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਨੂੰ ਵਧਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਹੈਰਾਨੀ ਦੀ ਗੱਲ ਹੈ ਕਿ, DEET HUVEC (ਡੇਟਾ ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ) ਅਤੇ HEK/M3 (ਚਿੱਤਰ 4a, b) ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਗਏ ਦੋਵਾਂ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣਾਂ ਲਈ ਸਾਇਟੋਪਲਾਜ਼ਮਿਕ ਕੈਲਸ਼ੀਅਮ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਵਿੱਚ ਅਸਫਲ ਰਿਹਾ।
ਪੋਸਟ ਸਮਾਂ: ਦਸੰਬਰ-30-2024