ਸੇਂਟ ਜੌਨ ਦੇ ਵੌਰਟ ਵਿੱਚ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਆਰਗੇਨੋਜੇਨੇਸਿਸ ਅਤੇ ਬਾਇਓਐਕਟਿਵ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੇ ਉਤਪਾਦਨ 'ਤੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੇ ਰੈਗੂਲੇਟਰਾਂ ਅਤੇ ਆਇਰਨ ਆਕਸਾਈਡ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੇ ਸਹਿਯੋਗੀ ਪ੍ਰਭਾਵ।

ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਸੰਯੁਕਤ ਇਲਾਜ ਦੇ ਉਤੇਜਕ ਪ੍ਰਭਾਵਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੇ ਰੈਗੂਲੇਟਰ*Hypericum perforatum* L. ਵਿੱਚ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਮੋਰਫੋਜੇਨੇਸਿਸ ਅਤੇ ਸੈਕੰਡਰੀ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟ ਉਤਪਾਦਨ 'ਤੇ (2,4-D ਅਤੇ ਕਾਇਨੇਟਿਨ) ਅਤੇ ਆਇਰਨ ਆਕਸਾਈਡ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ (Fe₃O₄-NPs) ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਇਲਾਜ [2,4-D (0.5 mg/L) + ਕਾਇਨੇਟਿਨ (2 mg/L) + Fe₃O₄-NPs (4 mg/L)] ਨੇ ਪੌਦੇ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਦੇ ਮਾਪਦੰਡਾਂ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਸੁਧਾਰ ਕੀਤਾ: ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਮੂਹ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਪੌਦੇ ਦੀ ਉਚਾਈ 59.6%, ਜੜ੍ਹ ਦੀ ਲੰਬਾਈ 114.0%, ਬਡ ਨੰਬਰ 180.0%, ਅਤੇ ਕੈਲਸ ਤਾਜ਼ੇ ਭਾਰ 198.3% ਵਧਿਆ। ਇਸ ਸੰਯੁਕਤ ਇਲਾਜ ਨੇ ਪੁਨਰਜਨਮ ਕੁਸ਼ਲਤਾ (50.85%) ਨੂੰ ਵੀ ਵਧਾਇਆ ਅਤੇ ਹਾਈਪਰਸਿਨ ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ 66.6% ਵਧਾਇਆ। GC-MS ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ ਹਾਈਪਰੋਸਾਈਡ, β-ਪੈਥੋਲੀਨ, ਅਤੇ ਸੇਟਿਲ ਅਲਕੋਹਲ ਦੀ ਉੱਚ ਸਮੱਗਰੀ ਦਾ ਖੁਲਾਸਾ ਕੀਤਾ, ਜੋ ਕੁੱਲ ਪੀਕ ਖੇਤਰ ਦਾ 93.36% ਬਣਦਾ ਹੈ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਕੁੱਲ ਫੀਨੋਲਿਕਸ ਅਤੇ ਫਲੇਵੋਨੋਇਡਜ਼ ਦੀ ਸਮੱਗਰੀ 80.1% ਤੱਕ ਵਧੀ ਹੈ। ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੇ ਰੈਗੂਲੇਟਰ (PGRs) ਅਤੇ Fe₃O₄ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ (Fe₃O₄-NPs) ਜੈਵਿਕ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੇ ਸੰਗ੍ਰਹਿ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰਕੇ ਅਤੇ ਜੈਵਿਕ-ਤਕਨੀਕੀ ਸੁਧਾਰ ਲਈ ਇੱਕ ਵਾਅਦਾ ਕਰਨ ਵਾਲੀ ਰਣਨੀਤੀ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।
ਸੇਂਟ ਜੌਨਜ਼ ਵਰਟ (ਹਾਈਪਰਿਕਮ ਪਰਫੋਰੇਟਮ ਐਲ.), ਜਿਸਨੂੰ ਸੇਂਟ ਜੌਨਜ਼ ਵਰਟ ਵੀ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਹਾਈਪਰਾਈਕੇਸੀ ਪਰਿਵਾਰ ਦਾ ਇੱਕ ਸਦੀਵੀ ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਵਾਲਾ ਪੌਦਾ ਹੈ ਜਿਸਦਾ ਆਰਥਿਕ ਮੁੱਲ ਹੈ।[1] ਇਸਦੇ ਸੰਭਾਵੀ ਜੈਵਿਕ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਹਿੱਸਿਆਂ ਵਿੱਚ ਕੁਦਰਤੀ ਟੈਨਿਨ, ਜ਼ੈਂਥੋਨ, ਫਲੋਰੋਗਲੂਸਿਨੋਲ, ਨੈਫਥਲੇਨੇਡੀਅਨਥ੍ਰੋਨ (ਹਾਈਪਰੀਨ ਅਤੇ ਸੂਡੋਹਾਈਪਰੀਨ), ਫਲੇਵੋਨੋਇਡਜ਼, ਫੀਨੋਲਿਕ ਐਸਿਡ ਅਤੇ ਜ਼ਰੂਰੀ ਤੇਲ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।[2,3,4] ਸੇਂਟ ਜੌਨਜ਼ ਵਰਟ ਨੂੰ ਰਵਾਇਤੀ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਸਾਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ; ਹਾਲਾਂਕਿ, ਰਵਾਇਤੀ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੀ ਮੌਸਮੀਤਾ, ਘੱਟ ਬੀਜ ਉਗਣ, ਅਤੇ ਬਿਮਾਰੀਆਂ ਪ੍ਰਤੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਇਸਦੀ ਵੱਡੇ ਪੱਧਰ 'ਤੇ ਕਾਸ਼ਤ ਅਤੇ ਸੈਕੰਡਰੀ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟਸ ਦੇ ਨਿਰੰਤਰ ਗਠਨ ਦੀ ਸੰਭਾਵਨਾ ਨੂੰ ਸੀਮਤ ਕਰਦੀ ਹੈ।[1,5,6]
ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਟਿਸ਼ੂ ਕਲਚਰ ਨੂੰ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਪ੍ਰਸਾਰ, ਜਰਮਪਲਾਜ਼ਮ ਸਰੋਤਾਂ ਦੀ ਸੰਭਾਲ, ਅਤੇ ਚਿਕਿਤਸਕ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੀ ਵਧਦੀ ਉਪਜ ਲਈ ਇੱਕ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਤਰੀਕਾ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ [7, 8]। ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੇ ਰੈਗੂਲੇਟਰ (PGRs) ਮੋਰਫੋਜੇਨੇਸਿਸ ਨੂੰ ਨਿਯਮਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਕੈਲਸ ਅਤੇ ਪੂਰੇ ਜੀਵਾਂ ਦੀ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਕਾਸ਼ਤ ਲਈ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹਨ। ਇਹਨਾਂ ਵਿਕਾਸ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਦੇ ਸਫਲਤਾਪੂਰਵਕ ਸੰਪੂਰਨਤਾ ਲਈ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਅਤੇ ਸੰਜੋਗਾਂ ਦਾ ਅਨੁਕੂਲਨ ਬਹੁਤ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ [9]। ਇਸ ਲਈ, ਸੇਂਟ ਜੌਨ ਦੇ ਵਰਟ (H. perforatum) [10] ਦੀ ਵਿਕਾਸ ਅਤੇ ਪੁਨਰਜਨਮ ਸਮਰੱਥਾ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਰੈਗੂਲੇਟਰਾਂ ਦੀ ਢੁਕਵੀਂ ਰਚਨਾ ਅਤੇ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ ਸਮਝਣਾ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ।
ਆਇਰਨ ਆਕਸਾਈਡ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ (Fe₃O₄) ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲਜ਼ ਦਾ ਇੱਕ ਵਰਗ ਹੈ ਜੋ ਟਿਸ਼ੂ ਕਲਚਰ ਲਈ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ ਜਾਂ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤੇ ਜਾ ਰਹੇ ਹਨ। Fe₃O₄ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਚੁੰਬਕੀ ਗੁਣ, ਚੰਗੀ ਬਾਇਓਕੰਪਟੀਬਿਲਟੀ, ਅਤੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਨ ਅਤੇ ਵਾਤਾਵਰਣ ਤਣਾਅ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਇਸਨੇ ਟਿਸ਼ੂ ਕਲਚਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨਾਂ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਧਿਆਨ ਖਿੱਚਿਆ ਹੈ। ਇਹਨਾਂ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲਜ਼ ਦੇ ਸੰਭਾਵੀ ਉਪਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਨ, ਪੌਸ਼ਟਿਕ ਤੱਤਾਂ ਦੇ ਗ੍ਰਹਿਣ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਉਣ ਅਤੇ ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਨ ਲਈ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਕਲਚਰ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉਣਾ ਸ਼ਾਮਲ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ [11]।
ਹਾਲਾਂਕਿ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲਾਂ ਨੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ 'ਤੇ ਚੰਗੇ ਪ੍ਰੋਤਸਾਹਨ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦਿਖਾਏ ਹਨ, ਪਰ *H. perforatum* ਵਿੱਚ Fe₃O₄ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲਾਂ ਅਤੇ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੇ ਰੈਗੂਲੇਟਰਾਂ ਦੇ ਸੰਯੁਕਤ ਉਪਯੋਗ 'ਤੇ ਅਧਿਐਨ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਰਹਿੰਦੇ ਹਨ। ਇਸ ਗਿਆਨ ਦੇ ਪਾੜੇ ਨੂੰ ਭਰਨ ਲਈ, ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਔਸ਼ਧੀ ਪੌਦਿਆਂ ਦੀਆਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਨਵੀਂ ਸੂਝ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨ ਲਈ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਮੋਰਫੋਜੇਨੇਸਿਸ ਅਤੇ ਸੈਕੰਡਰੀ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟ ਉਤਪਾਦਨ 'ਤੇ ਉਨ੍ਹਾਂ ਦੇ ਸੰਯੁਕਤ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ। ਇਸ ਲਈ, ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਦੇ ਦੋ ਉਦੇਸ਼ ਹਨ: (1) ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੇ ਰੈਗੂਲੇਟਰਾਂ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉਣਾ, ਸ਼ੂਟ ਪੁਨਰਜਨਮ, ਅਤੇ ਵਿਟਰੋ ਵਿੱਚ ਜੜ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਨਾ; ਅਤੇ (2) ਵਿਟਰੋ ਵਿੱਚ ਵਿਕਾਸ ਮਾਪਦੰਡਾਂ 'ਤੇ Fe₃O₄ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨਾ। ਭਵਿੱਖ ਦੀਆਂ ਯੋਜਨਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਅਨੁਕੂਲਤਾ (ਇਨ ਵਿਟਰੋ) ਦੌਰਾਨ ਪੁਨਰਜਨਿਤ ਪੌਦਿਆਂ ਦੀ ਬਚਾਅ ਦਰ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨਾ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ। ਇਹ ਉਮੀਦ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ *H. perforatum* ਦੀ ਮਾਈਕ੍ਰੋਪ੍ਰੋਪੈਗੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਸੁਧਾਰ ਕਰਨਗੇ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਇਸ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਔਸ਼ਧੀ ਪੌਦੇ ਦੀ ਟਿਕਾਊ ਵਰਤੋਂ ਅਤੇ ਬਾਇਓਟੈਕਨਾਲੌਜੀਕਲ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਵਿੱਚ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾਉਣਗੇ।
ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਖੇਤ ਵਿੱਚ ਉਗਾਏ ਗਏ ਸਾਲਾਨਾ ਸੇਂਟ ਜੌਨ ਦੇ ਵੌਰਟ ਪੌਦਿਆਂ (ਮਦਰ ਪਲਾਂਟ) ਤੋਂ ਪੱਤਿਆਂ ਦੇ ਐਕਸਪਲਾਂਟ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ। ਇਹਨਾਂ ਐਕਸਪਲਾਂਟਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਕਲਚਰ ਹਾਲਤਾਂ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਕਲਚਰ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਪੱਤਿਆਂ ਨੂੰ ਕਈ ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਚੱਲਦੇ ਡਿਸਟਿਲਡ ਪਾਣੀ ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਧੋਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਫਿਰ ਐਕਸਪਲਾਂਟ ਸਤਹਾਂ ਨੂੰ 70% ਈਥੇਨੌਲ ਵਿੱਚ 30 ਸਕਿੰਟਾਂ ਲਈ ਡੁਬੋ ਕੇ ਰੋਗਾਣੂ ਮੁਕਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਇਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 1.5% ਸੋਡੀਅਮ ਹਾਈਪੋਕਲੋਰਾਈਟ (NaOCl) ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਡੁਬੋਇਆ ਗਿਆ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਟਵੀਨ 20 ਦੀਆਂ ਕੁਝ ਬੂੰਦਾਂ 10 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਸਨ। ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਐਕਸਪਲਾਂਟਾਂ ਨੂੰ ਅਗਲੇ ਕਲਚਰ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਤਿੰਨ ਵਾਰ ਨਿਰਜੀਵ ਡਿਸਟਿਲਡ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਧੋਤਾ ਗਿਆ।
ਅਗਲੇ ਚਾਰ ਹਫ਼ਤਿਆਂ ਵਿੱਚ, ਸ਼ੂਟ ਰੀਜਨਰੇਸ਼ਨ ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਮਾਪੇ ਗਏ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਪੁਨਰਜਨਮ ਦਰ, ਪ੍ਰਤੀ ਐਕਸਪਲਾਂਟ ਸ਼ੂਟ ਨੰਬਰ, ਅਤੇ ਸ਼ੂਟ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ। ਜਦੋਂ ਪੁਨਰਜਨਮ ਸ਼ੂਟ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 2 ਸੈਂਟੀਮੀਟਰ ਦੀ ਲੰਬਾਈ 'ਤੇ ਪਹੁੰਚ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਤਾਂ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਰੂਟਿੰਗ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਅੱਧ-ਸ਼ਕਤੀ ਵਾਲਾ MS ਮਾਧਿਅਮ, 0.5 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ ਇੰਡੋਲਬਿਊਟੀਰਿਕ ਐਸਿਡ (IBA), ਅਤੇ 0.3% ਗੁਆਰ ਗਮ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਰੂਟਿੰਗ ਕਲਚਰ ਤਿੰਨ ਹਫ਼ਤਿਆਂ ਤੱਕ ਜਾਰੀ ਰਿਹਾ, ਜਿਸ ਦੌਰਾਨ ਰੂਟਿੰਗ ਦਰ, ਰੂਟ ਨੰਬਰ, ਅਤੇ ਰੂਟ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਮਾਪੀ ਗਈ। ਹਰੇਕ ਇਲਾਜ ਨੂੰ ਤਿੰਨ ਵਾਰ ਦੁਹਰਾਇਆ ਗਿਆ, ਪ੍ਰਤੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ 10 ਐਕਸਪਲਾਂਟ ਕਲਚਰ ਕੀਤੇ ਗਏ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਪ੍ਰਤੀ ਇਲਾਜ ਲਗਭਗ 30 ਐਕਸਪਲਾਂਟ ਪ੍ਰਾਪਤ ਹੋਏ।
ਪੌਦੇ ਦੀ ਉਚਾਈ ਨੂੰ ਇੱਕ ਰੂਲਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸੈਂਟੀਮੀਟਰ (ਸੈ.ਮੀ.) ਵਿੱਚ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ, ਪੌਦੇ ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੋਂ ਲੈ ਕੇ ਸਭ ਤੋਂ ਉੱਚੇ ਪੱਤੇ ਦੇ ਸਿਰੇ ਤੱਕ। ਪੌਦਿਆਂ ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਹਟਾਉਣ ਅਤੇ ਵਧ ਰਹੇ ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਤੋਂ ਤੁਰੰਤ ਬਾਅਦ ਜੜ੍ਹ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਮਿਲੀਮੀਟਰ (ਮਿਲੀਮੀਟਰ) ਵਿੱਚ ਮਾਪੀ ਗਈ। ਹਰੇਕ ਪੌਦੇ 'ਤੇ ਪ੍ਰਤੀ ਐਕਸਪਲਾਂਟ ਮੁਕੁਲਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਗਿਣੀ ਗਈ ਸੀ। ਪੱਤਿਆਂ 'ਤੇ ਕਾਲੇ ਧੱਬਿਆਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ, ਜਿਸਨੂੰ ਨੋਡਿਊਲ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਨੂੰ ਦ੍ਰਿਸ਼ਟੀਗਤ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਹ ਕਾਲੇ ਨੋਡਿਊਲ ਹਾਈਪਰੀਸਿਨ, ਜਾਂ ਆਕਸੀਡੇਟਿਵ ਧੱਬਿਆਂ ਵਾਲੀਆਂ ਗ੍ਰੰਥੀਆਂ ਮੰਨੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਇਲਾਜ ਪ੍ਰਤੀ ਪੌਦੇ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਦੇ ਸਰੀਰਕ ਸੂਚਕ ਵਜੋਂ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ। ਸਾਰੇ ਵਧ ਰਹੇ ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਤਾਜ਼ੇ ਭਾਰ ਨੂੰ ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ (ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ) ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਨਾਲ ਇੱਕ ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨਿਕ ਪੈਮਾਨੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਕੈਲਸ ਬਣਨ ਦੀ ਦਰ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਦਾ ਤਰੀਕਾ ਇਸ ਪ੍ਰਕਾਰ ਹੈ: ਚਾਰ ਹਫ਼ਤਿਆਂ ਲਈ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਵਿਕਾਸ ਰੈਗੂਲੇਟਰਾਂ (ਕਿਨੇਸ, 2,4-D, ਅਤੇ Fe3O4) ਵਾਲੇ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਐਕਸਪਲਾਂਟਾਂ ਨੂੰ ਕਲਚਰ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਕੈਲਸ ਬਣਾਉਣ ਦੇ ਸਮਰੱਥ ਐਕਸਪਲਾਂਟਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਗਿਣੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਕੈਲਸ ਬਣਨ ਦੀ ਦਰ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਦਾ ਫਾਰਮੂਲਾ ਇਸ ਪ੍ਰਕਾਰ ਹੈ:
ਹਰੇਕ ਇਲਾਜ ਨੂੰ ਤਿੰਨ ਵਾਰ ਦੁਹਰਾਇਆ ਗਿਆ, ਹਰੇਕ ਦੁਹਰਾਓ ਵਿੱਚ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 10 ਐਕਸਪਲਾਂਟਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ।
ਪੁਨਰਜਨਮ ਦਰ ਕੈਲਸ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ ਜੋ ਕੈਲਸ ਗਠਨ ਪੜਾਅ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਕਲੀ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਸਫਲਤਾਪੂਰਵਕ ਪੂਰਾ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਸੂਚਕ ਕੈਲਸ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਵਿਭਿੰਨ ਟਿਸ਼ੂ ਵਿੱਚ ਬਦਲਣ ਅਤੇ ਨਵੇਂ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਅੰਗਾਂ ਵਿੱਚ ਵਧਣ ਦੀ ਯੋਗਤਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਜੜ੍ਹਾਂ ਪਾਉਣ ਦਾ ਗੁਣਾਂਕ ਜੜ੍ਹਾਂ ਪਾਉਣ ਦੇ ਸਮਰੱਥ ਸ਼ਾਖਾਵਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਅਤੇ ਕੁੱਲ ਸ਼ਾਖਾਵਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਦਾ ਅਨੁਪਾਤ ਹੈ। ਇਹ ਸੂਚਕ ਜੜ੍ਹਾਂ ਪਾਉਣ ਦੇ ਪੜਾਅ ਦੀ ਸਫਲਤਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਸੂਖਮ ਪ੍ਰਸਾਰ ਅਤੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਚੰਗੀ ਜੜ੍ਹਾਂ ਪਾਉਣ ਨਾਲ ਬੂਟਿਆਂ ਨੂੰ ਵਧਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਬਿਹਤਰ ਢੰਗ ਨਾਲ ਜਿਉਂਦੇ ਰਹਿਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਮਿਲਦੀ ਹੈ।
ਹਾਈਪਰਿਸਿਨ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਨੂੰ 90% ਮੀਥੇਨੌਲ ਨਾਲ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਪੰਜਾਹ ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ ਸੁੱਕੇ ਪੌਦੇ ਦੇ ਪਦਾਰਥ ਨੂੰ 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਮੀਥੇਨੌਲ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਇੱਕ ਅਲਟਰਾਸੋਨਿਕ ਕਲੀਨਰ (ਮਾਡਲ A5120-3YJ) ਵਿੱਚ 30 kHz 'ਤੇ 20 ਮਿੰਟ ਲਈ ਸੋਨਿਕੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸੋਨਿਕੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ 15 ਮਿੰਟ ਲਈ 6000 rpm 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਕੌਨਸੀਕਾਓ ਐਟ ਅਲ ਦੁਆਰਾ ਦੱਸੇ ਗਏ ਢੰਗ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਪਲੱਸ-3000 S ਸਪੈਕਟਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਹਾਈਪਰਿਸਿਨ ਦੀ ਸੋਖਣਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ 592 nm 'ਤੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। [14]।
ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੇ ਰੈਗੂਲੇਟਰਾਂ (PGRs) ਅਤੇ ਆਇਰਨ ਆਕਸਾਈਡ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ (Fe₃O₄-NPs) ਨਾਲ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਇਲਾਜਾਂ ਨੇ ਪੁਨਰਜਨਮ ਕੀਤੇ ਟਹਿਣੀਆਂ ਦੇ ਪੱਤਿਆਂ 'ਤੇ ਕਾਲੇ ਨੋਡਿਊਲ ਬਣਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ। 0.5 ਜਾਂ 1 mg/L 2,4-D, 0.5 ਜਾਂ 1 mg/L ਕਾਇਨੇਟਿਨ, ਜਾਂ 1, 2, ਜਾਂ 4 mg/L ਆਇਰਨ ਆਕਸਾਈਡ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਵਾਲੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਇਲਾਜ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਨੋਡਿਊਲ ਨਹੀਂ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ। ਕੁਝ ਸੰਜੋਗਾਂ ਨੇ ਕਾਇਨੇਟਿਨ ਅਤੇ/ਜਾਂ ਆਇਰਨ ਆਕਸਾਈਡ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੀ ਉੱਚ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਨੋਡਿਊਲ ਵਿਕਾਸ ਵਿੱਚ ਥੋੜ੍ਹਾ ਜਿਹਾ ਵਾਧਾ ਦਿਖਾਇਆ (ਪਰ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਨਹੀਂ), ਜਿਵੇਂ ਕਿ 2,4-D (0.5–2 mg/L) ਦਾ ਕਾਇਨੇਟਿਨ (1–1.5 mg/L) ਅਤੇ ਆਇਰਨ ਆਕਸਾਈਡ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ (2–4 mg/L) ਨਾਲ ਸੁਮੇਲ। ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਚਿੱਤਰ 2 ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਏ ਗਏ ਹਨ। ਕਾਲੇ ਨੋਡਿਊਲ ਹਾਈਪਰੀਸਿਨ-ਅਮੀਰ ਗ੍ਰੰਥੀਆਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਦੋਵੇਂ ਕੁਦਰਤੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਹੋਣ ਵਾਲੇ ਅਤੇ ਲਾਭਦਾਇਕ। ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਕਾਲੇ ਨੋਡਿਊਲ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਦੇ ਭੂਰੇ ਹੋਣ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਸਨ, ਜੋ ਹਾਈਪਰੀਸਿਨ ਇਕੱਠਾ ਹੋਣ ਲਈ ਇੱਕ ਅਨੁਕੂਲ ਵਾਤਾਵਰਣ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। 2,4-D, ਕਾਇਨੇਟਿਨ, ਅਤੇ Fe₃O₄ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲਜ਼ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਨੇ ਕੈਲਸ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕੀਤਾ, ਭੂਰਾਪਨ ਘਟਾਇਆ, ਅਤੇ ਕਲੋਰੋਫਿਲ ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਮੈਟਾਬੋਲਿਕ ਫੰਕਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਅਤੇ ਆਕਸੀਡੇਟਿਵ ਨੁਕਸਾਨ ਦੀ ਸੰਭਾਵੀ ਕਮੀ ਦਾ ਸੁਝਾਅ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ [37]। ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਸੇਂਟ ਜੌਨ ਦੇ ਵਰਟ ਕੈਲਸ ਦੇ ਵਾਧੇ ਅਤੇ ਵਿਕਾਸ 'ਤੇ 2,4-D ਅਤੇ Fe₃O₄ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲਜ਼ ਦੇ ਸੁਮੇਲ ਵਿੱਚ ਕਾਇਨੇਟਿਨ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ (ਚਿੱਤਰ 3a–g)। ਪਿਛਲੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ Fe₃O₄ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲਜ਼ ਵਿੱਚ ਐਂਟੀਫੰਗਲ ਅਤੇ ਐਂਟੀਮਾਈਕਰੋਬਾਇਲ ਗਤੀਵਿਧੀਆਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ [38, 39] ਅਤੇ, ਜਦੋਂ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੇ ਰੈਗੂਲੇਟਰਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਸੁਮੇਲ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਬਚਾਅ ਵਿਧੀਆਂ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸੈਲੂਲਰ ਤਣਾਅ ਸੂਚਕਾਂਕ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ [18]। ਹਾਲਾਂਕਿ ਸੈਕੰਡਰੀ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟਸ ਦਾ ਬਾਇਓਸਿੰਥੇਸਿਸ ਜੈਨੇਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਉਨ੍ਹਾਂ ਦਾ ਅਸਲ ਝਾੜ ਵਾਤਾਵਰਣ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ 'ਤੇ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਮੈਟਾਬੋਲਿਕ ਅਤੇ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨਿਕ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਖਾਸ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਨਿਯਮਤ ਕਰਕੇ ਅਤੇ ਵਾਤਾਵਰਣਕ ਕਾਰਕਾਂ ਦਾ ਜਵਾਬ ਦੇ ਕੇ ਸੈਕੰਡਰੀ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟ ਪੱਧਰਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਇੰਡਿਊਸਰ ਨਵੇਂ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਹੋਣ ਨੂੰ ਚਾਲੂ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਬਦਲੇ ਵਿੱਚ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਅੰਤ ਵਿੱਚ ਕਈ ਬਾਇਓਸਿੰਥੈਟਿਕ ਮਾਰਗਾਂ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਸੈਕੰਡਰੀ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟਸ ਦੇ ਗਠਨ ਵੱਲ ਲੈ ਜਾਂਦੇ ਹਨ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਇੱਕ ਹੋਰ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਛਾਂ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਨਾਲ ਸੂਰਜ ਦੀ ਰੌਸ਼ਨੀ ਦੇ ਸੰਪਰਕ ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ *ਹਾਈਪਰਿਕਮ ਪਰਫੋਰੇਟਮ* ਦੇ ਕੁਦਰਤੀ ਨਿਵਾਸ ਸਥਾਨ ਵਿੱਚ ਦਿਨ ਦਾ ਤਾਪਮਾਨ ਵਧਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਹਾਈਪਰਿਸਿਨ ਉਪਜ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਵਿੱਚ ਵੀ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਹਨਾਂ ਡੇਟਾ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ, ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਟਿਸ਼ੂ ਕਲਚਰ ਵਿੱਚ ਸੰਭਾਵੀ ਇੰਡਿਊਸਰਾਂ ਵਜੋਂ ਆਇਰਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟੀਕਲ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ। ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਇਹ ਨੈਨੋਪਾਰਟੀਕਲ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਉਤੇਜਨਾ ਦੁਆਰਾ ਹੇਸਪੇਰੀਡਿਨ ਬਾਇਓਸਿੰਥੇਸਿਸ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਇਸ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦਾ ਇਕੱਠਾ ਹੋਣਾ ਵਧਦਾ ਹੈ (ਚਿੱਤਰ 2)। ਇਸ ਲਈ, ਕੁਦਰਤੀ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਵਧ ਰਹੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, ਇਹ ਦਲੀਲ ਦਿੱਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ ਕਿ ਵਿਵੋ ਵਿੱਚ ਅਜਿਹੇ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੇ ਉਤਪਾਦਨ ਨੂੰ ਵੀ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਦੋਂ ਦਰਮਿਆਨੀ ਤਣਾਅ ਨੂੰ ਸੈਕੰਡਰੀ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟਸ ਦੇ ਬਾਇਓਸਿੰਥੇਸਿਸ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਸੰਯੁਕਤ ਇਲਾਜਾਂ ਦਾ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪੁਨਰਜਨਮ ਦਰ 'ਤੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪੈਂਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਕੁਝ ਮਾਮਲਿਆਂ ਵਿੱਚ, ਇਹ ਪ੍ਰਭਾਵ ਕਮਜ਼ੋਰ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ, 1 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ 2,4-ਡੀ, 1.5 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ ਕਾਇਨੇਜ, ਅਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣਾਂ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਸੁਤੰਤਰ ਤੌਰ 'ਤੇ ਅਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਕੰਟਰੋਲ ਸਮੂਹ (ਚਿੱਤਰ 4c) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਪੁਨਰਜਨਮ ਦਰ ਨੂੰ 50.85% ਵਧਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਨੈਨੋਹਾਰਮੋਨ ਦੇ ਖਾਸ ਸੁਮੇਲ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਅਤੇ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟ ਉਤਪਾਦਨ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਸਹਿਯੋਗੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਕਿ ਔਸ਼ਧੀ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਕਲਚਰ ਲਈ ਬਹੁਤ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ। ਪਾਮਰ ਅਤੇ ਕੈਲਰ [50] ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ 2,4-ਡੀ ਇਲਾਜ ਸੇਂਟ ਪਰਫੋਰੈਟਮ ਵਿੱਚ ਸੁਤੰਤਰ ਤੌਰ 'ਤੇ ਕੈਲਸ ਗਠਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਕਿਨੇਜ ਦੇ ਜੋੜ ਨੇ ਕੈਲਸ ਗਠਨ ਅਤੇ ਪੁਨਰਜਨਮ ਨੂੰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਧਾਇਆ ਹੈ। ਇਹ ਪ੍ਰਭਾਵ ਹਾਰਮੋਨਲ ਸੰਤੁਲਨ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਦੀ ਉਤੇਜਨਾ ਦੇ ਕਾਰਨ ਸੀ। ਬਾਲ ਐਟ ਅਲ [51] ਨੇ ਪਾਇਆ ਕਿ Fe₃O₄-NP ਇਲਾਜ ਸੁਤੰਤਰ ਤੌਰ 'ਤੇ ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੇ ਕਾਰਜ ਨੂੰ ਵਧਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਸੇਂਟ ਪਰਫੋਰੈਟਮ ਵਿੱਚ ਜੜ੍ਹਾਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। 0.5 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ, 1 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ, ਅਤੇ 1.5 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ Fe₃O₄ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਵਾਲੇ ਕਲਚਰ ਮੀਡੀਆ ਨੇ ਸਣ ਦੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੀ ਪੁਨਰਜਨਮ ਦਰ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਕੀਤਾ [52]। ਕਾਇਨੇਟਿਨ, 2,4-ਡਾਈਕਲੋਰੋਬੇਂਜ਼ੋਥਿਆਜ਼ੋਲਿਨੋਨ, ਅਤੇ Fe₃O₄ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਨੇ ਕੈਲਸ ਅਤੇ ਜੜ੍ਹਾਂ ਦੇ ਗਠਨ ਦਰਾਂ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਸੁਧਾਰ ਕੀਤਾ ਹੈ, ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਪੁਨਰਜਨਮ ਲਈ ਇਹਨਾਂ ਹਾਰਮੋਨਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਦੇ ਸੰਭਾਵੀ ਮਾੜੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ 'ਤੇ ਵਿਚਾਰ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ। ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, 2,4-ਡਾਈਕਲੋਰੋਬੇਂਜ਼ੋਥਿਆਜ਼ੋਲਿਨੋਨ ਜਾਂ ਕਾਇਨੇਟਿਨ ਦੀ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਦੀ ਜਾਂ ਉੱਚ-ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਸੋਮੈਟਿਕ ਕਲੋਨਲ ਪਰਿਵਰਤਨ, ਆਕਸੀਡੇਟਿਵ ਤਣਾਅ, ਅਸਧਾਰਨ ਕੈਲਸ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ, ਜਾਂ ਵਿਟ੍ਰੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ, ਇੱਕ ਉੱਚ ਪੁਨਰਜਨਮ ਦਰ ਜ਼ਰੂਰੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜੈਨੇਟਿਕ ਸਥਿਰਤਾ ਦੀ ਭਵਿੱਖਬਾਣੀ ਨਹੀਂ ਕਰਦੀ। ਸਾਰੇ ਪੁਨਰਜਨਮ ਕੀਤੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਅਣੂ ਮਾਰਕਰਾਂ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ RAPD, ISSR, AFLP) ਜਾਂ ਸਾਈਟੋਜੈਨੇਟਿਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਸਮਰੂਪਤਾ ਅਤੇ ਇਨ ਵਿਵੋ ਪੌਦਿਆਂ ਨਾਲ ਸਮਾਨਤਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕੇ [53,54,55]।
ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਪਹਿਲੀ ਵਾਰ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ Fe₃O₄ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੇ ਨਾਲ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੇ ਰੈਗੂਲੇਟਰਾਂ (2,4-D ਅਤੇ ਕਾਇਨੇਟਿਨ) ਦੀ ਸੰਯੁਕਤ ਵਰਤੋਂ *Hypericum perforatum* ਵਿੱਚ ਮੋਰਫੋਜੇਨੇਸਿਸ ਅਤੇ ਮੁੱਖ ਬਾਇਓਐਕਟਿਵ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟਸ (ਹਾਈਪਰੀਸਿਨ ਅਤੇ ਹਾਈਪਰੋਸਾਈਡ ਸਮੇਤ) ਦੇ ਇਕੱਠੇ ਹੋਣ ਨੂੰ ਵਧਾ ਸਕਦੀ ਹੈ। ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਇਲਾਜ ਵਿਧੀ (1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L ਕਾਇਨੇਟਿਨ + 4 mg/L Fe₃O₄-NPs) ਨੇ ਨਾ ਸਿਰਫ਼ ਕੈਲਸ ਗਠਨ, ਆਰਗੇਨੋਜੇਨੇਸਿਸ, ਅਤੇ ਸੈਕੰਡਰੀ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟ ਉਪਜ ਨੂੰ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਕੀਤਾ ਬਲਕਿ ਇੱਕ ਹਲਕੇ ਪ੍ਰੇਰਕ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦਾ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਵੀ ਕੀਤਾ, ਸੰਭਾਵੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪੌਦੇ ਦੀ ਤਣਾਅ ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਚਿਕਿਤਸਕ ਮੁੱਲ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਕੀਤਾ। ਨੈਨੋਟੈਕਨਾਲੋਜੀ ਅਤੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਕਲਚਰ ਦਾ ਸੁਮੇਲ ਚਿਕਿਤਸਕ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੇ ਵੱਡੇ ਪੱਧਰ 'ਤੇ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਉਤਪਾਦਨ ਲਈ ਇੱਕ ਟਿਕਾਊ ਅਤੇ ਕੁਸ਼ਲ ਪਲੇਟਫਾਰਮ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਉਦਯੋਗਿਕ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਅਤੇ ਭਵਿੱਖ ਵਿੱਚ ਅਣੂ ਵਿਧੀਆਂ, ਖੁਰਾਕ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਅਤੇ ਜੈਨੇਟਿਕ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਵਿੱਚ ਖੋਜ ਲਈ ਰਾਹ ਪੱਧਰਾ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਚਿਕਿਤਸਕ ਪੌਦਿਆਂ 'ਤੇ ਬੁਨਿਆਦੀ ਖੋਜ ਨੂੰ ਵਿਹਾਰਕ ਬਾਇਓਟੈਕਨਾਲੋਜੀ ਨਾਲ ਜੋੜਦੇ ਹਨ।