ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਗਿਬਰੇਲਿਨ ਬਾਇਓਸੈਂਸਰ ਸ਼ੂਟ ਐਪੀਕਲ ਮੈਰੀਸਟਮ ਵਿੱਚ ਇੰਟਰਨੋਡ ਸਪੈਸੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਗਿਬਰੇਲਿਨ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਗਟ ਕਰਦਾ ਹੈ।

ਤਣੇ ਦੀ ਬਣਤਰ ਲਈ ਸ਼ੂਟ ਐਪੀਕਲ ਮੈਰੀਸਟਮ (SAM) ਦਾ ਵਾਧਾ ਬਹੁਤ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ। ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਹਾਰਮੋਨਗਿਬਰੇਲਿਨ(GAs) ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੇ ਤਾਲਮੇਲ ਵਿੱਚ ਮੁੱਖ ਭੂਮਿਕਾਵਾਂ ਨਿਭਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਪਰ SAM ਵਿੱਚ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਅਜੇ ਵੀ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਸਮਝਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇੱਥੇ, ਅਸੀਂ GA ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਇਸਦੇ ਜ਼ਰੂਰੀ ਰੈਗੂਲੇਟਰੀ ਫੰਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਦਬਾਉਣ ਲਈ DELLA ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਇੰਜੀਨੀਅਰਿੰਗ ਕਰਕੇ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਦਾ ਇੱਕ ਰੇਸ਼ੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਬਾਇਓਸੈਂਸਰ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਹੈ ਜਦੋਂ ਕਿ GA ਪਛਾਣ 'ਤੇ ਇਸਦੇ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਰੱਖਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਇਹ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ-ਅਧਾਰਿਤ ਬਾਇਓਸੈਂਸਰ ਵਿਕਾਸ ਦੌਰਾਨ GA ਪੱਧਰਾਂ ਅਤੇ ਸੈਲੂਲਰ ਸੈਂਸਿੰਗ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਨੂੰ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਰਿਕਾਰਡ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਇਸ ਬਾਇਓਸੈਂਸਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ SAM ਵਿੱਚ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਮੈਪ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ। ਅਸੀਂ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਉੱਚ GA ਸਿਗਨਲ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਅੰਗ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਆ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਸਥਿਤ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਇੰਟਰਨੋਡ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਪੂਰਵਗਾਮੀ ਹਨ। ਲਾਭ- ਅਤੇ ਫੰਕਸ਼ਨ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਦੇ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਅਸੀਂ ਅੱਗੇ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ GA ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ ਦੇ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਇੰਟਰਨੋਡਾਂ ਦੇ ਕੈਨੋਨੀਕਲ ਸੈਲੂਲਰ ਸੰਗਠਨ ਨੂੰ ਸਥਾਪਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ SAM ਵਿੱਚ ਇੰਟਰਨੋਡ ਨਿਰਧਾਰਨ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਸ਼ੂਟ ਐਪੀਕਲ ਮੈਰੀਸਟਮ (SAM), ਜੋ ਕਿ ਸ਼ੂਟ ਦੇ ਸਿਖਰ 'ਤੇ ਸਥਿਤ ਹੈ, ਵਿੱਚ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਇੱਕ ਸਥਾਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਪੌਦੇ ਦੇ ਜੀਵਨ ਦੌਰਾਨ ਇੱਕ ਮਾਡਯੂਲਰ ਅਤੇ ਦੁਹਰਾਉਣ ਵਾਲੇ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਪਾਸੇ ਦੇ ਅੰਗਾਂ ਅਤੇ ਸਟੈਮ ਨੋਡਾਂ ਨੂੰ ਪੈਦਾ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਇਹਨਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਹਰੇਕ ਦੁਹਰਾਉਣ ਵਾਲੀਆਂ ਇਕਾਈਆਂ, ਜਾਂ ਪੌਦੇ ਦੇ ਨੋਡਾਂ ਵਿੱਚ, ਨੋਡਾਂ 'ਤੇ ਇੰਟਰਨੋਡ ਅਤੇ ਪਾਸੇ ਦੇ ਅੰਗ, ਅਤੇ ਪੱਤੇ ਦੇ ਧੁਰੇ ਵਿੱਚ ਐਕਸੀਲਰੀ ਮੈਰੀਸਟਮ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ1। ਵਿਕਾਸ ਦੌਰਾਨ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਨੋਡਾਂ ਦਾ ਵਾਧਾ ਅਤੇ ਸੰਗਠਨ ਬਦਲਦਾ ਹੈ। ਅਰਬੀਡੋਪਸਿਸ ਵਿੱਚ, ਬਨਸਪਤੀ ਪੜਾਅ ਦੌਰਾਨ ਇੰਟਰਨੋਡਲ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਦਬਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਐਕਸੀਲਰੀ ਮੈਰੀਸਟਮ ਗੁਲਾਬ ਦੇ ਪੱਤਿਆਂ ਦੇ ਧੁਰੇ ਵਿੱਚ ਸੁਸਤ ਰਹਿੰਦੇ ਹਨ। ਫੁੱਲਾਂ ਦੇ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀ ਦੌਰਾਨ, SAM ਫੁੱਲਾਂ ਦਾ ਮੈਰੀਸਟਮ ਬਣ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਲੰਬੇ ਇੰਟਰਨੋਡ ਅਤੇ ਐਕਸੀਲਰੀ ਕਲੀਆਂ, ਕੌਲੀਨ ਪੱਤਿਆਂ ਦੇ ਧੁਰੇ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਖਾਵਾਂ, ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ, ਪੱਤੇ ਰਹਿਤ ਫੁੱਲ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ2। ਹਾਲਾਂਕਿ ਅਸੀਂ ਪੱਤਿਆਂ, ਫੁੱਲਾਂ ਅਤੇ ਸ਼ਾਖਾਵਾਂ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਨ ਵਾਲੀਆਂ ਵਿਧੀਆਂ ਨੂੰ ਸਮਝਣ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤਰੱਕੀ ਕੀਤੀ ਹੈ, ਇੰਟਰਨੋਡ ਕਿਵੇਂ ਪੈਦਾ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਇਸ ਬਾਰੇ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
GAs ਦੇ ਸਪੇਸੀਓਟੈਂਪੋਰਲ ਵੰਡ ਨੂੰ ਸਮਝਣ ਨਾਲ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਅਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਵਿਕਾਸ ਪੜਾਵਾਂ 'ਤੇ ਇਹਨਾਂ ਹਾਰਮੋਨਾਂ ਦੇ ਕਾਰਜਾਂ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਢੰਗ ਨਾਲ ਸਮਝਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਮਿਲੇਗੀ। ਇਸਦੇ ਆਪਣੇ ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਦੀ ਕਿਰਿਆ ਅਧੀਨ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੇ ਗਏ RGA-GFP ਫਿਊਜ਼ਨ ਦੇ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਦਾ ਵਿਜ਼ੂਅਲਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਜੜ੍ਹਾਂ15,16 ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ GA ਪੱਧਰਾਂ ਦੇ ਨਿਯਮਨ ਬਾਰੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਜਾਣਕਾਰੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, RGA ਪ੍ਰਗਟਾਵਾ ਟਿਸ਼ੂਆਂ17 ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ GA18 ਦੁਆਰਾ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, RGA ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਦੇ ਵਿਭਿੰਨ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ RGA-GFP ਨਾਲ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਪੈਟਰਨ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਇਹ ਵਿਧੀ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਨਹੀਂ ਹੈ। ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ, ਬਾਇਓਐਕਟਿਵ ਫਲੋਰੋਸਸੀਨ (Fl)-ਲੇਬਲ ਵਾਲੇ GA19,20 ਨੇ ਰੂਟ ਐਂਡੋਕਾਰਟੈਕਸ ਵਿੱਚ GA ਦੇ ਇਕੱਠਾ ਹੋਣ ਅਤੇ GA ਟ੍ਰਾਂਸਪੋਰਟ ਦੁਆਰਾ ਇਸਦੇ ਸੈਲੂਲਰ ਪੱਧਰਾਂ ਦੇ ਨਿਯਮਨ ਦਾ ਖੁਲਾਸਾ ਕੀਤਾ। ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ, GA FRET ਸੈਂਸਰ nlsGPS1 ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ GA ਪੱਧਰ ਜੜ੍ਹਾਂ, ਫਿਲਾਮੈਂਟਸ, ਅਤੇ ਗੂੜ੍ਹੇ-ਉੱਗੇ ਹੋਏ ਹਾਈਪੋਕੋਟਾਈਲਸ21 ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਲੰਬਾਈ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਹਨ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਅਸੀਂ ਦੇਖਿਆ ਹੈ, GA ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਨ ਵਾਲਾ ਇਕਲੌਤਾ ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਇਹ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਸੰਵੇਦਨਾ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇੱਥੇ, DELLA ਅਤੇ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਮਾਰਗਾਂ ਦੀ ਸਾਡੀ ਸਮਝ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ, ਅਸੀਂ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਲਈ ਇੱਕ ਡਿਗ੍ਰੇਡੇਸ਼ਨ-ਅਧਾਰਿਤ ਰੇਸ਼ੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਬਾਇਓਸੈਂਸਰ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਅਤੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕਰਦੇ ਹਾਂ। ਇਸ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਬਾਇਓਸੈਂਸਰ ਨੂੰ ਵਿਕਸਤ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਇੱਕ ਮਿਊਟੈਂਟ GA-ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ RGA ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜੋ ਇੱਕ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਸੀ ਅਤੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਸਰਵ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਨਾਲ ਹੀ ਇੱਕ GA-ਅਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵੀ। ਅਸੀਂ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਮਿਊਟੈਂਟ RGA ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਫਿਊਜ਼ਨ ਐਂਡੋਜੇਨਸ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਵਿੱਚ ਵਿਘਨ ਨਹੀਂ ਪਾਉਂਦੇ ਜਦੋਂ ਸਰਵ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਬਾਇਓਸੈਂਸਰ ਉੱਚ ਸਪੈਟੀਓਟੈਂਪੋਰਲ ਰੈਜ਼ੋਲਿਊਸ਼ਨ ਵਾਲੇ ਸੈਂਸਿੰਗ ਉਪਕਰਣ ਦੁਆਰਾ GA ਇਨਪੁਟ ਅਤੇ GA ਸਿਗਨਲ ਪ੍ਰੋਸੈਸਿੰਗ ਦੋਵਾਂ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਮਾਪ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਇਸ ਬਾਇਓਸੈਂਸਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੇ ਸਪੈਟੀਓਟੈਂਪੋਰਲ ਵੰਡ ਨੂੰ ਮੈਪ ਕਰਨ ਅਤੇ ਇਹ ਮਾਪਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਕਿ GA SAM ਐਪੀਡਰਰਮਿਸ ਵਿੱਚ ਸੈਲੂਲਰ ਵਿਵਹਾਰ ਨੂੰ ਕਿਵੇਂ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਾਂ ਕਿ GA ਅੰਗ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਆ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਸਥਿਤ SAM ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ ਦੇ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਇੰਟਰਨੋਡ ਦੇ ਕੈਨੋਨੀਕਲ ਸੈਲੂਲਰ ਸੰਗਠਨ ਨੂੰ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਪੁੱਛਿਆ ਕਿ ਕੀ qmRGA ਵਧ ਰਹੇ ਹਾਈਪੋਕੋਟਾਈਲਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਐਂਡੋਜੇਨਸ GA ਪੱਧਰਾਂ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਪਹਿਲਾਂ ਦਿਖਾਇਆ ਸੀ ਕਿ ਨਾਈਟ੍ਰੇਟ GA ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਨੂੰ ਵਧਾ ਕੇ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਬਦਲੇ ਵਿੱਚ, DELLA34 ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ। ਇਸ ਅਨੁਸਾਰ, ਅਸੀਂ ਦੇਖਿਆ ਕਿ ਭਰਪੂਰ ਨਾਈਟ੍ਰੇਟ ਸਪਲਾਈ (10 mM NO3−) ਅਧੀਨ ਉਗਾਏ ਗਏ pUBQ10::qmRGA ਬੂਟਿਆਂ ਵਿੱਚ ਹਾਈਪੋਕੋਟਾਈਲ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਨਾਈਟ੍ਰੇਟ-ਘਾਟ ਵਾਲੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 6a) ਅਧੀਨ ਉਗਾਏ ਗਏ ਬੂਟਿਆਂ ਨਾਲੋਂ ਕਾਫ਼ੀ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੀ। ਵਿਕਾਸ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, GA ਸਿਗਨਲ ਨਾਈਟ੍ਰੇਟ ਦੀ ਅਣਹੋਂਦ ਵਿੱਚ ਉਗਾਏ ਗਏ ਬੂਟਿਆਂ ਨਾਲੋਂ 10 mM NO3− ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਉਗਾਏ ਗਏ ਬੂਟਿਆਂ ਦੇ ਹਾਈਪੋਕੋਟਾਈਲਾਂ ਵਿੱਚ ਵੱਧ ਸਨ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 6b, c)। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, qmRGA GA ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਿੱਚ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰੇਰਿਤ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦੀ ਨਿਗਰਾਨੀ ਨੂੰ ਵੀ ਸਮਰੱਥ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਇਹ ਸਮਝਣ ਲਈ ਕਿ ਕੀ qmRGA ਦੁਆਰਾ ਖੋਜੀ ਗਈ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ GA ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਅਤੇ GA ਧਾਰਨਾ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਸੈਂਸਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਉਮੀਦ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਅਸੀਂ ਬਨਸਪਤੀ ਅਤੇ ਪ੍ਰਜਨਨ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਤਿੰਨ GID1 ਰੀਸੈਪਟਰਾਂ ਦੀ ਸਮੀਕਰਨ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ। ਬੀਜਾਂ ਵਿੱਚ, GID1-GUS ਰਿਪੋਰਟਰ ਲਾਈਨ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ GID1a ਅਤੇ c ਕੋਟਾਈਲਡਨ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ (ਚਿੱਤਰ 3a–c)। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਤਿੰਨੋਂ ਰੀਸੈਪਟਰ ਪੱਤਿਆਂ, ਲੇਟਰਲ ਰੂਟ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਆ, ਰੂਟ ਟਿਪਸ (GID1b ਦੇ ਰੂਟ ਕੈਪ ਨੂੰ ਛੱਡ ਕੇ), ਅਤੇ ਨਾੜੀ ਪ੍ਰਣਾਲੀ (ਚਿੱਤਰ 3a–c) ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਫੁੱਲ SAM ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਸਿਰਫ GID1b ਅਤੇ 1c ਲਈ GUS ਸਿਗਨਲਾਂ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਇਆ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 7a–c)। ਇਨ ਸੀਟੂ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਨੇ ਇਹਨਾਂ ਸਮੀਕਰਨ ਪੈਟਰਨਾਂ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ ਅਤੇ ਅੱਗੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ GID1c SAM ਵਿੱਚ ਘੱਟ ਪੱਧਰਾਂ 'ਤੇ ਇਕਸਾਰ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਦੋਂ ਕਿ GID1b ਨੇ SAM ਦੇ ਘੇਰੇ 'ਤੇ ਉੱਚ ਸਮੀਕਰਨ ਦਿਖਾਇਆ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 7d–l)। pGID1b::2xmTQ2-GID1b ਅਨੁਵਾਦਕ ਫਿਊਜ਼ਨ ਨੇ GID1b ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੀ ਇੱਕ ਗ੍ਰੇਡ ਕੀਤੀ ਰੇਂਜ ਦਾ ਵੀ ਖੁਲਾਸਾ ਕੀਤਾ, SAM ਦੇ ਕੇਂਦਰ ਵਿੱਚ ਘੱਟ ਜਾਂ ਬਿਨਾਂ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਤੋਂ ਲੈ ਕੇ ਅੰਗਾਂ ਦੀਆਂ ਸਰਹੱਦਾਂ 'ਤੇ ਉੱਚ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਤੱਕ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 7m)। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, GID1 ਰੀਸੈਪਟਰ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਅਤੇ ਅੰਦਰ ਇੱਕਸਾਰ ਵੰਡੇ ਨਹੀਂ ਜਾਂਦੇ ਹਨ। ਬਾਅਦ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਇਹ ਵੀ ਦੇਖਿਆ ਕਿ GID1 (pUBQ10::GID1a-mCherry) ਦੇ ਓਵਰਐਕਸਪ੍ਰੈਸ਼ਨ ਨੇ ਹਾਈਪੋਕੋਟਾਈਲ ਵਿੱਚ qmRGA ਦੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਬਾਹਰੀ GA ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ (ਚਿੱਤਰ 3d, e) ਵਿੱਚ ਵਧਾ ਦਿੱਤਾ। ਇਸਦੇ ਉਲਟ, ਹਾਈਪੋਕੋਟਾਈਲ ਵਿੱਚ qd17mRGA ਦੁਆਰਾ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ GA3 ਇਲਾਜ (ਚਿੱਤਰ 3f, g) ਪ੍ਰਤੀ ਅਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਸੀ। ਦੋਵਾਂ ਅਸੈਸਾਂ ਲਈ, ਸੈਂਸਰ ਦੇ ਤੇਜ਼ ਵਿਵਹਾਰ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ GA (100 μM GA3) ਦੀ ਉੱਚ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨਾਲ ਬੂਟਿਆਂ ਦਾ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿੱਥੇ GID1 ਰੀਸੈਪਟਰ ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹਣ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਵਧਾਈ ਗਈ ਸੀ ਜਾਂ ਖਤਮ ਹੋ ਗਈ ਸੀ। ਇਕੱਠੇ ਮਿਲ ਕੇ, ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਇਸ ਗੱਲ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਦੇ ਹਨ ਕਿ qmRGA ਬਾਇਓਸੈਂਸਰ ਇੱਕ GA ਅਤੇ GA ਸੈਂਸਰ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸੰਯੁਕਤ ਕਾਰਜ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ GID1 ਰੀਸੈਪਟਰ ਦੀ ਵਿਭਿੰਨ ਸਮੀਕਰਨ ਸੈਂਸਰ ਦੀ ਐਮਿਸੀਵਿਟੀ ਨੂੰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ।
ਅੱਜ ਤੱਕ, SAM ਵਿੱਚ GA ਸਿਗਨਲਾਂ ਦੀ ਵੰਡ ਅਸਪਸ਼ਟ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ, ਅਸੀਂ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੇ ਉੱਚ-ਰੈਜ਼ੋਲੂਸ਼ਨ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਨਕਸ਼ਿਆਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਲਈ qmRGA-ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਵਾਲੇ ਪੌਦਿਆਂ ਅਤੇ pCLV3::mCherry-NLS ਸਟੈਮ ਸੈੱਲ ਰਿਪੋਰਟਰ35 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ, L1 ਪਰਤ (ਐਪੀਡਰਮਿਸ; ਚਿੱਤਰ 4a, b, ਵਿਧੀਆਂ ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਵਿਧੀਆਂ ਵੇਖੋ) 'ਤੇ ਧਿਆਨ ਕੇਂਦਰਿਤ ਕੀਤਾ, ਕਿਉਂਕਿ L1 SAM ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ36। ਇੱਥੇ, pCLV3::mCherry-NLS ਸਮੀਕਰਨ ਨੇ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ37 ਦੇ ਸਪੇਸੀਓਟੈਂਪੋਰਲ ਵੰਡ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਸਥਿਰ ਜਿਓਮੈਟ੍ਰਿਕ ਸੰਦਰਭ ਬਿੰਦੂ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤਾ। ਹਾਲਾਂਕਿ GA ਨੂੰ ਲੇਟਰਲ ਅੰਗ ਵਿਕਾਸ4 ਲਈ ਜ਼ਰੂਰੀ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਸੀਂ ਦੇਖਿਆ ਕਿ P3 ਪੜਾਅ (ਚਿੱਤਰ 4a, b) ਤੋਂ ਸ਼ੁਰੂ ਹੋਣ ਵਾਲੇ ਫੁੱਲਦਾਰ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਅਮ (P) ਵਿੱਚ GA ਸਿਗਨਲ ਘੱਟ ਸਨ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਨੌਜਵਾਨ P1 ਅਤੇ P2 ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਅਮ ਵਿੱਚ ਕੇਂਦਰੀ ਖੇਤਰ (ਚਿੱਤਰ 4a, b) ਦੇ ਸਮਾਨ ਦਰਮਿਆਨੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਸੀ। ਉੱਚ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਅੰਗ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਅਮ ਸੀਮਾਵਾਂ 'ਤੇ ਪਾਈ ਗਈ, ਜੋ P1/P2 (ਸੀਮਾ ਦੇ ਪਾਸਿਆਂ 'ਤੇ) ਤੋਂ ਸ਼ੁਰੂ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ P4 'ਤੇ ਸਿਖਰ 'ਤੇ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਨਾਲ ਹੀ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਆ (ਚਿੱਤਰ 4a, b ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 8a, b) ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਸਥਿਤ ਪੈਰੀਫਿਰਲ ਖੇਤਰ ਦੇ ਸਾਰੇ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਵੀ ਦੇਖੀ ਗਈ। ਇਹ ਉੱਚ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨਾ ਸਿਰਫ਼ ਐਪੀਡਰਰਮਿਸ ਵਿੱਚ ਸਗੋਂ L2 ਅਤੇ ਉੱਪਰਲੀਆਂ L3 ਪਰਤਾਂ ਵਿੱਚ ਵੀ ਦੇਖੀ ਗਈ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 8b)। qmRGA ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ SAM ਵਿੱਚ ਖੋਜੇ ਗਏ GA ਸਿਗਨਲਾਂ ਦਾ ਪੈਟਰਨ ਵੀ ਸਮੇਂ ਦੇ ਨਾਲ ਬਦਲਿਆ ਨਹੀਂ ਗਿਆ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 8c–f, k)। ਹਾਲਾਂਕਿ qd17mRGA ਨਿਰਮਾਣ ਨੂੰ ਪੰਜ ਸੁਤੰਤਰ ਲਾਈਨਾਂ ਤੋਂ T3 ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ SAM ਵਿੱਚ ਯੋਜਨਾਬੱਧ ਢੰਗ ਨਾਲ ਘਟਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਅਸੀਂ ਵਿਸਥਾਰ ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਇਆ ਹੈ, ਅਸੀਂ pRPS5a::VENUS-2A-TagBFP ਨਿਰਮਾਣ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 8g–j, l) ਨਾਲ ਪ੍ਰਾਪਤ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਪੈਟਰਨਾਂ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨ ਦੇ ਯੋਗ ਸੀ। ਇਸ ਕੰਟਰੋਲ ਲਾਈਨ ਵਿੱਚ, SAM ਵਿੱਚ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਅਨੁਪਾਤ ਵਿੱਚ ਸਿਰਫ਼ ਮਾਮੂਲੀ ਬਦਲਾਅ ਹੀ ਪਾਏ ਗਏ ਸਨ, ਪਰ SAM ਸੈਂਟਰ ਵਿੱਚ ਅਸੀਂ TagBFP ਨਾਲ ਜੁੜੇ VENUS ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸਪੱਸ਼ਟ ਅਤੇ ਅਚਾਨਕ ਕਮੀ ਦੇਖੀ। ਇਹ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਦਾ ਹੈ ਕਿ qmRGA ਦੁਆਰਾ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਪੈਟਰਨ mRGA-VENUS ਦੇ GA-ਨਿਰਭਰ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਇਹ ਵੀ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ qmRGA ਮੈਰੀਸਟਮ ਸੈਂਟਰ ਵਿੱਚ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਜ਼ਿਆਦਾ ਅੰਦਾਜ਼ਾ ਲਗਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਇੱਕ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਪੈਟਰਨ ਦਾ ਖੁਲਾਸਾ ਕਰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਆ ਦੀ ਵੰਡ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇੰਟਰ-ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਆਲ ਖੇਤਰ (IPR) ਦੀ ਇਹ ਵੰਡ ਵਿਕਾਸਸ਼ੀਲ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਅਮ ਅਤੇ ਕੇਂਦਰੀ ਖੇਤਰ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਉੱਚ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੀ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਸਥਾਪਨਾ ਦੇ ਕਾਰਨ ਹੈ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਉਸੇ ਸਮੇਂ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਅਮ ਵਿੱਚ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਘਟਦੀ ਹੈ (ਚਿੱਤਰ 4c, d)।
GID1b ਅਤੇ GID1c ਰੀਸੈਪਟਰਾਂ ਦੀ ਵੰਡ (ਉੱਪਰ ਦੇਖੋ) ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੀ ਹੈ ਕਿ GA ਰੀਸੈਪਟਰਾਂ ਦੀ ਵਿਭਿੰਨ ਸਮੀਕਰਨ SAM ਵਿੱਚ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੇ ਪੈਟਰਨ ਨੂੰ ਆਕਾਰ ਦੇਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਸੋਚਿਆ ਕਿ ਕੀ GA ਦਾ ਵਿਭਿੰਨ ਇਕੱਠਾ ਹੋਣਾ ਸ਼ਾਮਲ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਸੰਭਾਵਨਾ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ nlsGPS1 GA FRET ਸੈਂਸਰ21 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ। 100 ਮਿੰਟ ਲਈ 10 μM GA4+7 ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ nlsGPS1 ਦੇ SAM ਵਿੱਚ ਵਧੀ ਹੋਈ ਸਰਗਰਮੀ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 9a–e), ਇਹ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ nlsGPS1 SAM ਵਿੱਚ GA ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦਾ ਜਵਾਬ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਇਹ ਜੜ੍ਹਾਂ21 ਵਿੱਚ ਕਰਦਾ ਹੈ। nlsGPS1 ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ ਦੀ ਸਥਾਨਿਕ ਵੰਡ ਨੇ SAM ਦੀਆਂ ਬਾਹਰੀ ਪਰਤਾਂ ਵਿੱਚ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਘੱਟ GA ਪੱਧਰਾਂ ਦਾ ਖੁਲਾਸਾ ਕੀਤਾ, ਪਰ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਉਹ ਕੇਂਦਰ ਵਿੱਚ ਅਤੇ SAM ਦੀਆਂ ਸਰਹੱਦਾਂ 'ਤੇ ਉੱਚੇ ਸਨ (ਚਿੱਤਰ 4e ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 9a,c)। ਇਹ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ GA ਨੂੰ SAM ਵਿੱਚ ਵੀ ਵੰਡਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜਿਸਦੀ ਤੁਲਨਾ qmRGA ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ। ਇੱਕ ਪੂਰਕ ਪਹੁੰਚ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਅਸੀਂ SAM ਨੂੰ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ GA (GA3-, GA4-, GA7-Fl) ਜਾਂ ਸਿਰਫ਼ Fl ਨਾਲ ਇੱਕ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ ਵੀ ਮੰਨਿਆ। Fl ਸਿਗਨਲ ਪੂਰੇ SAM ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਕੇਂਦਰੀ ਖੇਤਰ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਅਮ ਸ਼ਾਮਲ ਸੀ, ਹਾਲਾਂਕਿ ਘੱਟ ਤੀਬਰਤਾ 'ਤੇ (ਚਿੱਤਰ 4j ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 10d)। ਇਸਦੇ ਉਲਟ, ਤਿੰਨੋਂ GA-Fl ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਅਮ ਬਾਰਡਰਾਂ ਦੇ ਅੰਦਰ ਅਤੇ ਬਾਕੀ IPR ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਡਿਗਰੀਆਂ ਤੱਕ ਇਕੱਠੇ ਹੋਏ, GA7-Fl IPR ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਡੇ ਡੋਮੇਨ ਵਿੱਚ ਇਕੱਠੇ ਹੋਏ (ਚਿੱਤਰ 4k ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 10a,b)। ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਤੀਬਰਤਾ ਦੇ ਮਾਤਰਾਕਰਨ ਤੋਂ ਪਤਾ ਚੱਲਿਆ ਕਿ Fl-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ SAM (ਚਿੱਤਰ 4l ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 10c) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ GA-Fl-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ SAM ਵਿੱਚ IPR ਤੋਂ ਗੈਰ-IPR ਤੀਬਰਤਾ ਅਨੁਪਾਤ ਵੱਧ ਸੀ। ਇਕੱਠੇ ਮਿਲ ਕੇ, ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ GA ਅੰਗ ਸੀਮਾ ਦੇ ਸਭ ਤੋਂ ਨੇੜੇ ਸਥਿਤ IPR ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਉੱਚ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਮੌਜੂਦ ਹੈ। ਇਹ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ SAM GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦਾ ਪੈਟਰਨ GA ਰੀਸੈਪਟਰਾਂ ਦੇ ਵਿਭਿੰਨ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਅਤੇ ਅੰਗਾਂ ਦੀਆਂ ਸਰਹੱਦਾਂ ਦੇ ਨੇੜੇ IPR ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ GA ਦੇ ਵਿਭਿੰਨ ਸੰਚਵ ਦੋਵਾਂ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਸਾਡੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਦੇ ਇੱਕ ਅਚਾਨਕ ਸਪੇਸੀਓਟੈਂਪੋਰਲ ਪੈਟਰਨ ਦਾ ਖੁਲਾਸਾ ਕੀਤਾ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ SAM ਦੇ ਕੇਂਦਰ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਅਮ ਵਿੱਚ ਘੱਟ ਗਤੀਵਿਧੀ ਅਤੇ ਪੈਰੀਫਿਰਲ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ IPR ਵਿੱਚ ਉੱਚ ਗਤੀਵਿਧੀ ਸੀ।
SAM ਵਿੱਚ ਡਿਫਰੈਂਸ਼ੀਅਲ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਸਮਝਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ SAM qmRGA pCLV3::mCherry-NLS ਦੀ ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ ਟਾਈਮ-ਲੈਪਸ ਇਮੇਜਿੰਗ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ, ਸੈੱਲ ਵਿਸਥਾਰ, ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਵਿਚਕਾਰ ਸਬੰਧ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ। ਵਿਕਾਸ ਨਿਯਮ ਵਿੱਚ GA ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਦੇਖਦੇ ਹੋਏ, ਸੈੱਲ ਵਿਸਥਾਰ ਪੈਰਾਮੀਟਰਾਂ ਨਾਲ ਇੱਕ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਸਬੰਧ ਦੀ ਉਮੀਦ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਇਸ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਪਹਿਲਾਂ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੇ ਨਕਸ਼ਿਆਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਸੈੱਲ ਸਤਹ ਵਿਕਾਸ ਦਰ ਦੇ ਨਕਸ਼ਿਆਂ ਨਾਲ ਕੀਤੀ (ਇੱਕ ਦਿੱਤੇ ਸੈੱਲ ਲਈ ਸੈੱਲ ਵਿਸਥਾਰ ਦੀ ਤਾਕਤ ਲਈ ਇੱਕ ਪ੍ਰੌਕਸੀ ਵਜੋਂ ਅਤੇ ਡਿਵੀਜ਼ਨ 'ਤੇ ਧੀ ਸੈੱਲਾਂ ਲਈ) ਅਤੇ ਵਿਕਾਸ ਐਨੀਸੋਟ੍ਰੋਪੀ ਦੇ ਨਕਸ਼ਿਆਂ ਨਾਲ, ਜੋ ਸੈੱਲ ਵਿਸਥਾਰ ਦੀ ਦਿਸ਼ਾ ਨੂੰ ਮਾਪਦਾ ਹੈ (ਇੱਥੇ ਇੱਕ ਦਿੱਤੇ ਸੈੱਲ ਲਈ ਅਤੇ ਵੰਡ 'ਤੇ ਧੀ ਸੈੱਲਾਂ ਲਈ ਵੀ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ਚਿੱਤਰ 5a,b, ਵਿਧੀਆਂ ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਵਿਧੀਆਂ ਵੇਖੋ)। SAM ਸੈੱਲ ਸਤਹ ਵਿਕਾਸ ਦਰ ਦੇ ਸਾਡੇ ਨਕਸ਼ੇ ਪਿਛਲੇ ਨਿਰੀਖਣਾਂ 38,39 ਦੇ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਹਨ, ਸਰਹੱਦ 'ਤੇ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਵਿਕਾਸ ਦਰਾਂ ਅਤੇ ਵਿਕਾਸਸ਼ੀਲ ਫੁੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਿਕਾਸ ਦਰਾਂ (ਚਿੱਤਰ 5a) ਦੇ ਨਾਲ। ਪ੍ਰਿੰਸੀਪਲ ਕੰਪੋਨੈਂਟ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ (PCA) ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਸੈੱਲ ਸਤਹ ਵਿਕਾਸ ਤੀਬਰਤਾ (ਚਿੱਤਰ 5c) ਨਾਲ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਸੀ। ਅਸੀਂ ਇਹ ਵੀ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਇਨਪੁੱਟ ਅਤੇ ਵਿਕਾਸ ਤੀਬਰਤਾ ਸਮੇਤ ਪਰਿਵਰਤਨ ਦੇ ਮੁੱਖ ਧੁਰੇ, ਉੱਚ CLV3 ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਦਿਸ਼ਾ ਵੱਲ ਔਰਥੋਗੋਨਲ ਸਨ, ਬਾਕੀ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣਾਂ ਵਿੱਚ SAM ਕੇਂਦਰ ਤੋਂ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਬਾਹਰ ਹੋਣ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਸਪੀਅਰਮੈਨ ਸਹਿ-ਸੰਬੰਧ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ PCA ਨਤੀਜਿਆਂ (ਚਿੱਤਰ 5d) ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ, ਜੋ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ IPR ਵਿੱਚ ਉੱਚ GA ਸਿਗਨਲਾਂ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਉੱਚ ਸੈੱਲ ਵਿਸਥਾਰ ਨਹੀਂ ਹੋਇਆ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਸਹਿ-ਸੰਬੰਧ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਅਤੇ ਵਿਕਾਸ ਐਨੀਸੋਟ੍ਰੋਪੀ (ਚਿੱਤਰ 5c, d) ਵਿਚਕਾਰ ਇੱਕ ਥੋੜ੍ਹਾ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਸਬੰਧ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤਾ, ਜੋ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ IPR ਵਿੱਚ ਉੱਚ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਸੈੱਲ ਵਿਕਾਸ ਦੀ ਦਿਸ਼ਾ ਅਤੇ ਸੰਭਵ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ ਦੀ ਸਥਿਤੀ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।
a, b SAM ਵਿੱਚ ਔਸਤ ਸਤਹ ਵਿਕਾਸ (a) ਅਤੇ ਵਿਕਾਸ ਐਨੀਸੋਟ੍ਰੋਪੀ (b) ਦੇ ਗਰਮੀ ਦੇ ਨਕਸ਼ੇ ਸੱਤ ਸੁਤੰਤਰ ਪੌਦਿਆਂ ਤੋਂ ਵੱਧ ਔਸਤ ਸਨ (ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਸੈੱਲ ਵਿਸਥਾਰ ਦੀ ਤਾਕਤ ਅਤੇ ਦਿਸ਼ਾ ਲਈ ਪ੍ਰੌਕਸੀ ਵਜੋਂ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ)। c PCA ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਿੱਚ ਹੇਠ ਲਿਖੇ ਵੇਰੀਏਬਲ ਸ਼ਾਮਲ ਸਨ: GA ਸਿਗਨਲ, ਸਤਹ ਵਿਕਾਸ ਤੀਬਰਤਾ, ​​ਸਤਹ ਵਿਕਾਸ ਐਨੀਸੋਟ੍ਰੋਪੀ, ਅਤੇ CLV3 ਸਮੀਕਰਨ। PCA ਕੰਪੋਨੈਂਟ 1 ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਤਹ ਵਿਕਾਸ ਤੀਬਰਤਾ ਨਾਲ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਸੀ ਅਤੇ GA ਸਿਗਨਲ ਨਾਲ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਸੀ। PCA ਕੰਪੋਨੈਂਟ 2 ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਤਹ ਵਿਕਾਸ ਐਨੀਸੋਟ੍ਰੋਪੀ ਨਾਲ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਸੀ ਅਤੇ CLV3 ਸਮੀਕਰਨ ਨਾਲ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਸੀ। ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਹਰੇਕ ਕੰਪੋਨੈਂਟ ਦੁਆਰਾ ਸਮਝਾਏ ਗਏ ਭਿੰਨਤਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। d CZ ਨੂੰ ਛੱਡ ਕੇ ਟਿਸ਼ੂ ਸਕੇਲ 'ਤੇ GA ਸਿਗਨਲ, ਸਤਹ ਵਿਕਾਸ ਤੀਬਰਤਾ, ​​ਅਤੇ ਸਤਹ ਵਿਕਾਸ ਐਨੀਸੋਟ੍ਰੋਪੀ ਵਿਚਕਾਰ ਸਪੀਅਰਮੈਨ ਸਹਿ-ਸੰਬੰਧ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ। ਸੱਜੇ ਪਾਸੇ ਦੀ ਸੰਖਿਆ ਦੋ ਵੇਰੀਏਬਲਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਸਪੀਅਰਮੈਨ rho ਮੁੱਲ ਹੈ। ਤਾਰੇ ਉਨ੍ਹਾਂ ਮਾਮਲਿਆਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਜਿੱਥੇ ਸਹਿ-ਸੰਬੰਧ/ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਸਬੰਧ ਬਹੁਤ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ। e ਕਨਫੋਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਦੁਆਰਾ Col-0 SAM L1 ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ 3D ਵਿਜ਼ੂਅਲਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ। 10 ਘੰਟੇ 'ਤੇ SAM (ਪਰ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਅਮ ਨਹੀਂ) ਵਿੱਚ ਬਣੀਆਂ ਨਵੀਆਂ ਸੈੱਲ ਕੰਧਾਂ ਨੂੰ ਉਨ੍ਹਾਂ ਦੇ ਕੋਣ ਮੁੱਲਾਂ ਅਨੁਸਾਰ ਰੰਗ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਰੰਗ ਪੱਟੀ ਹੇਠਲੇ ਸੱਜੇ ਕੋਨੇ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਈ ਗਈ ਹੈ। ਇਨਸੈੱਟ 0 ਘੰਟੇ 'ਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ 3D ਚਿੱਤਰ ਦਿਖਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਪ੍ਰਯੋਗ ਨੂੰ ਦੋ ਵਾਰ ਇੱਕੋ ਜਿਹੇ ਨਤੀਜਿਆਂ ਨਾਲ ਦੁਹਰਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। f ਬਾਕਸ ਪਲਾਟ IPR ਅਤੇ ਗੈਰ-IPR Col-0 SAM (n = 10 ਸੁਤੰਤਰ ਪੌਦਿਆਂ) ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਦਰਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਕੇਂਦਰੀ ਲਾਈਨ ਮੱਧਮਾਨ ਦਿਖਾਉਂਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਬਾਕਸ ਸੀਮਾਵਾਂ 25ਵੇਂ ਅਤੇ 75ਵੇਂ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀਆਂ ਹਨ। ਵਿਸਕਰ R ਸਾਫਟਵੇਅਰ ਨਾਲ ਨਿਰਧਾਰਤ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਅਤੇ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਮੁੱਲ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। P ਮੁੱਲ ਵੈਲਚ ਦੇ ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਨਾਲ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। g, h ਯੋਜਨਾਬੱਧ ਚਿੱਤਰ ਦਿਖਾ ਰਿਹਾ ਹੈ (g) SAM ਦੇ ਕੇਂਦਰ ਤੋਂ ਰੇਡੀਅਲ ਦਿਸ਼ਾ ਦੇ ਸੰਬੰਧ ਵਿੱਚ ਨਵੀਂ ਸੈੱਲ ਕੰਧ (ਮੈਜੈਂਟਾ) ਦੇ ਕੋਣ ਨੂੰ ਕਿਵੇਂ ਮਾਪਣਾ ਹੈ (ਚਿੱਟੀ ਬਿੰਦੀ ਵਾਲੀ ਲਾਈਨ) (ਸਿਰਫ ਤੀਬਰ ਕੋਣ ਮੁੱਲ, ਭਾਵ, 0-90°, ਨੂੰ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ), ਅਤੇ (h) ਮੈਰੀਸਟਮ ਦੇ ਅੰਦਰ ਘੇਰਾ/ਪਾਸੜ ਅਤੇ ਰੇਡੀਅਲ ਦਿਸ਼ਾਵਾਂ। i ਕ੍ਰਮਵਾਰ SAM (ਗੂੜ੍ਹਾ ਨੀਲਾ), IPR (ਮੱਧਮ ਨੀਲਾ), ਅਤੇ ਗੈਰ-IPR (ਹਲਕਾ ਨੀਲਾ) ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ ਦੇ ਫ੍ਰੀਕੁਐਂਸੀ ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮ। P ਮੁੱਲ ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਕੋਲਮੋਗੋਰੋਵ-ਸਮਿਰਨੋਵ ਟੈਸਟ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਪ੍ਰਯੋਗ ਨੂੰ ਸਮਾਨ ਨਤੀਜਿਆਂ ਨਾਲ ਦੋ ਵਾਰ ਦੁਹਰਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। j ਕ੍ਰਮਵਾਰ P3 (ਹਲਕਾ ਹਰਾ), P4 (ਮੱਧਮ ਹਰਾ), ਅਤੇ P5 (ਗੂੜ੍ਹਾ ਹਰਾ) ਦੇ ਆਲੇ-ਦੁਆਲੇ IPR ਦੇ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ ਦੇ ਫ੍ਰੀਕੁਐਂਸੀ ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮ। P ਮੁੱਲ ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਕੋਲਮੋਗੋਰੋਵ-ਸਮਿਰਨੋਵ ਟੈਸਟ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਪ੍ਰਯੋਗ ਨੂੰ ਸਮਾਨ ਨਤੀਜਿਆਂ ਨਾਲ ਦੋ ਵਾਰ ਦੁਹਰਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਇਸ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਅੱਗੇ ਪਰਖ ਦੌਰਾਨ ਨਵੀਆਂ ਬਣੀਆਂ ਸੈੱਲ ਕੰਧਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਕੇ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਗਤੀਵਿਧੀ ਵਿਚਕਾਰ ਸਬੰਧ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ (ਚਿੱਤਰ 5e)। ਇਸ ਪਹੁੰਚ ਨੇ ਸਾਨੂੰ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਦੀ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ ਅਤੇ ਦਿਸ਼ਾ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੱਤੀ। ਹੈਰਾਨੀ ਦੀ ਗੱਲ ਹੈ ਕਿ, ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ IPR ਅਤੇ ਬਾਕੀ SAM (ਗੈਰ-IPR, ਚਿੱਤਰ 5f) ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਦੀ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ ਸਮਾਨ ਸੀ, ਜੋ ਇਹ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ ਕਿ IPR ਅਤੇ ਗੈਰ-IPR ਸੈੱਲਾਂ ਵਿਚਕਾਰ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਵਿੱਚ ਅੰਤਰ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਨੂੰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਨਹੀਂ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਇਹ, ਅਤੇ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਅਤੇ ਵਿਕਾਸ ਐਨੀਸੋਟ੍ਰੋਪੀ ਵਿਚਕਾਰ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਸਬੰਧ, ਨੇ ਸਾਨੂੰ ਇਹ ਵਿਚਾਰ ਕਰਨ ਲਈ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕੀਤਾ ਕਿ ਕੀ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ ਦੇ ਦਿਸ਼ਾ-ਨਿਰਦੇਸ਼ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਨਵੀਂ ਸੈੱਲ ਦੀਵਾਰ ਦੀ ਸਥਿਤੀ ਨੂੰ ਮੈਰੀਸਟਮ ਸੈਂਟਰ ਅਤੇ ਨਵੀਂ ਸੈੱਲ ਦੀਵਾਰ ਦੇ ਕੇਂਦਰ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਵਾਲੇ ਰੇਡੀਅਲ ਧੁਰੇ ਦੇ ਸਾਪੇਖਕ ਇੱਕ ਤੀਬਰ ਕੋਣ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਮਾਪਿਆ (ਚਿੱਤਰ 5e-i) ਅਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਲਈ ਰੇਡੀਅਲ ਧੁਰੇ ਦੇ ਸਾਪੇਖਕ 90° ਦੇ ਨੇੜੇ ਕੋਣਾਂ 'ਤੇ ਵੰਡਣ ਦੀ ਇੱਕ ਸਪੱਸ਼ਟ ਪ੍ਰਵਿਰਤੀ ਦੇਖੀ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਫ੍ਰੀਕੁਐਂਸੀ 70–80° (23.28%) ਅਤੇ 80–90° (22.62%) (ਚਿੱਤਰ 5e,i) 'ਤੇ ਦੇਖੀ ਗਈ, ਜੋ ਕਿ ਘੇਰਾਬੰਦੀ/ਟ੍ਰਾਂਸਵਰਸ ਦਿਸ਼ਾ (ਚਿੱਤਰ 5h) ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਹੈ। ਇਸ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਵਿਵਹਾਰ ਵਿੱਚ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਦੇ ਯੋਗਦਾਨ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ IPR ਅਤੇ ਗੈਰ-IPR ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪੈਰਾਮੀਟਰਾਂ ਦਾ ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ (ਚਿੱਤਰ 5i)। ਅਸੀਂ ਦੇਖਿਆ ਕਿ IPR ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਐਂਗਲ ਡਿਸਟ੍ਰੀਬਿਊਸ਼ਨ ਗੈਰ-IPR ਸੈੱਲਾਂ ਜਾਂ ਪੂਰੇ SAM ਵਿੱਚ ਸੈੱਲਾਂ ਨਾਲੋਂ ਵੱਖਰਾ ਸੀ, IPR ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਲੇਟਰਲ/ਸਰਕੂਲਰ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨਾਂ ਦਾ ਉੱਚ ਅਨੁਪਾਤ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਭਾਵ, 70–80° ਅਤੇ 80–90° (ਕ੍ਰਮਵਾਰ 33.86% ਅਤੇ 30.71%, ਅਨੁਸਾਰੀ ਅਨੁਪਾਤ) (ਚਿੱਤਰ 5i)। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਸਾਡੇ ਨਿਰੀਖਣਾਂ ਨੇ ਉੱਚ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਅਤੇ ਘੇਰੇ ਦੀ ਦਿਸ਼ਾ ਦੇ ਨੇੜੇ ਇੱਕ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ ਵਿਚਕਾਰ ਇੱਕ ਸਬੰਧ ਦਾ ਖੁਲਾਸਾ ਕੀਤਾ, ਜੋ ਕਿ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਅਤੇ ਵਿਕਾਸ ਐਨੀਸੋਟ੍ਰੋਪੀ (ਚਿੱਤਰ 5c, d) ਵਿਚਕਾਰ ਸਬੰਧ ਦੇ ਸਮਾਨ ਹੈ। ਇਸ ਐਸੋਸੀਏਸ਼ਨ ਦੇ ਸਥਾਨਿਕ ਸੰਭਾਲ ਨੂੰ ਹੋਰ ਸਥਾਪਿਤ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ P3 ਤੋਂ ਸ਼ੁਰੂ ਹੋ ਕੇ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਅਮ ਦੇ ਆਲੇ ਦੁਆਲੇ IPR ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਮਾਪਿਆ, ਕਿਉਂਕਿ P4 ਤੋਂ ਸ਼ੁਰੂ ਹੋ ਕੇ ਇਸ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ (ਚਿੱਤਰ 4)। P3 ਅਤੇ P4 ਦੇ ਆਲੇ ਦੁਆਲੇ IPR ਦੇ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਐਂਗਲਾਂ ਨੇ ਕੋਈ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਇਆ, ਹਾਲਾਂਕਿ P4 ਦੇ ਆਲੇ ਦੁਆਲੇ IPR ਵਿੱਚ ਲੇਟਰਲ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨਾਂ ਦੀ ਵਧੀ ਹੋਈ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ ਦੇਖੀ ਗਈ ਸੀ (ਚਿੱਤਰ 5j)। ਹਾਲਾਂਕਿ, P5 ਦੇ ਆਲੇ-ਦੁਆਲੇ IPR ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ, ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ ਦੇ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਅੰਤਰ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਬਣ ਗਿਆ, ਟ੍ਰਾਂਸਵਰਸ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨਾਂ ਦੀ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ ਵਿੱਚ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਵਾਧਾ ਹੋਇਆ (ਚਿੱਤਰ 5j)। ਇਕੱਠੇ ਮਿਲ ਕੇ, ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ SAM ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨਾਂ ਦੇ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਪਿਛਲੀਆਂ ਰਿਪੋਰਟਾਂ ਦੇ ਅਨੁਕੂਲ ਹੈ40,41 ਕਿ ਉੱਚ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ IPR ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨਾਂ ਦੇ ਲੇਟਰਲ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਇਹ ਭਵਿੱਖਬਾਣੀ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ ਕਿ IPR ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਆ ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ ਸਗੋਂ ਇੰਟਰਨੋਡਸ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤੇ ਜਾਣਗੇ2,42,43। IPR ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨਾਂ ਦੀ ਟ੍ਰਾਂਸਵਰਸ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਇੰਟਰਨੋਡਸ ਵਿੱਚ ਐਪੀਡਰਮਲ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀਆਂ ਸਮਾਨਾਂਤਰ ਲੰਬਕਾਰੀ ਕਤਾਰਾਂ ਦਾ ਆਮ ਸੰਗਠਨ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਉੱਪਰ ਦੱਸੇ ਗਏ ਸਾਡੇ ਨਿਰੀਖਣ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਸੰਭਾਵਤ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਦੀ ਦਿਸ਼ਾ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਕੇ ਇਸ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਕਈ DELLA ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਫੰਕਸ਼ਨ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਇੱਕ ਸੰਵਿਧਾਨਕ GA ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਸ ਪਰਿਕਲਪਨਾ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ ਡੇਲਾ ਮਿਊਟੈਂਟਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ44। ਅਸੀਂ ਪਹਿਲਾਂ SAM ਵਿੱਚ ਪੰਜ DELLA ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ ਪੈਟਰਨਾਂ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ। GUS ਲਾਈਨ45 ਦੇ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਫਿਊਜ਼ਨ ਨੇ ਖੁਲਾਸਾ ਕੀਤਾ ਕਿ GAI, RGA, RGL1, ਅਤੇ RGL2 (ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੱਦ ਤੱਕ) SAM ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 11a–d)। ਇਨ ਸੀਟੂ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਨੇ ਅੱਗੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ GAI mRNA ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਆ ਅਤੇ ਵਿਕਾਸਸ਼ੀਲ ਫੁੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਇਕੱਠਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 11e)। RGL1 ਅਤੇ RGL3 mRNA ਨੂੰ SAM ਕੈਨੋਪੀ ਵਿੱਚ ਅਤੇ ਪੁਰਾਣੇ ਫੁੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਖੋਜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਦੋਂ ਕਿ RGL2 mRNA ਸਰਹੱਦੀ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ ਵਧੇਰੇ ਭਰਪੂਰ ਸੀ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 11f–h)। pRGL3::RGL3-GFP SAM ਦੀ ਕਨਫੋਕਲ ਇਮੇਜਿੰਗ ਨੇ ਇਨ ਸੀਟੂ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਦੇਖੇ ਗਏ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ ਅਤੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ RGL3 ਪ੍ਰੋਟੀਨ SAM ਦੇ ਕੇਂਦਰੀ ਹਿੱਸੇ ਵਿੱਚ ਇਕੱਠਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 11i)। pRGA::GFP-RGA ਲਾਈਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਅਸੀਂ ਇਹ ਵੀ ਪਾਇਆ ਕਿ RGA ਪ੍ਰੋਟੀਨ SAM ਵਿੱਚ ਇਕੱਠਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਪਰ P4 ਤੋਂ ਸ਼ੁਰੂ ਹੋਣ ਵਾਲੀ ਸਰਹੱਦ 'ਤੇ ਇਸਦੀ ਭਰਪੂਰਤਾ ਘੱਟ ਜਾਂਦੀ ਹੈ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 11j)। ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ, RGL3 ਅਤੇ RGA ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ ਪੈਟਰਨ IPR ਵਿੱਚ ਉੱਚ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੇ ਅਨੁਕੂਲ ਹਨ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ qmRGA (ਚਿੱਤਰ 4) ਦੁਆਰਾ ਖੋਜਿਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਇਹ ਡੇਟਾ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਸਾਰੇ DELLA SAM ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਸਮੂਹਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪੂਰੇ SAM ਵਿੱਚ ਫੈਲਦੀ ਹੈ।
ਅਸੀਂ ਅੱਗੇ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੇ SAM (Ler, ਕੰਟਰੋਲ) ਅਤੇ gai-t6 rga-t2 rgl1-1 rgl2-1 rgl3-4 della quintuple (ਗਲੋਬਲ) ਮਿਊਟੈਂਟਸ (ਚਿੱਤਰ 6a, b) ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪੈਰਾਮੀਟਰਾਂ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ। ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, ਅਸੀਂ ਜੰਗਲੀ ਕਿਸਮ (ਚਿੱਤਰ 6c) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਡੇਲਾ ਗਲੋਬਲ ਮਿਊਟੈਂਟ SAM ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਐਂਗਲ ਫ੍ਰੀਕੁਐਂਸੀ ਦੀ ਵੰਡ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤਬਦੀਲੀ ਦੇਖੀ। ਡੇਲਾ ਗਲੋਬਲ ਮਿਊਟੈਂਟ ਵਿੱਚ ਇਹ ਤਬਦੀਲੀ 80-90° ਕੋਣਾਂ (34.71% ਬਨਾਮ 24.55%) ਦੀ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ ਵਿੱਚ ਵਾਧੇ ਅਤੇ, ਕੁਝ ਹੱਦ ਤੱਕ, 70-80° ਕੋਣਾਂ (23.78% ਬਨਾਮ 20.18%) ਦੇ ਕਾਰਨ ਸੀ, ਭਾਵ, ਟ੍ਰਾਂਸਵਰਸ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨਾਂ (ਚਿੱਤਰ 6c) ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ। ਡੇਲਾ ਗਲੋਬਲ ਮਿਊਟੈਂਟ (ਚਿੱਤਰ 6c) ਵਿੱਚ ਗੈਰ-ਟ੍ਰਾਂਸਵਰਸ ਡਿਵੀਜ਼ਨਾਂ (0-60°) ਦੀ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ ਵੀ ਘੱਟ ਸੀ। ਡੇਲਾ ਗਲੋਬਲ ਮਿਊਟੈਂਟ (ਚਿੱਤਰ 6b) ਦੇ SAM ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਵਰਸ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਦੀ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਵਾਧਾ ਹੋਇਆ ਸੀ। ਜੰਗਲੀ ਕਿਸਮ (ਚਿੱਤਰ 6d) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਡੇਲਾ ਗਲੋਬਲ ਮਿਊਟੈਂਟ ਵਿੱਚ IPR ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਵਰਸ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਦੀ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ ਵੀ ਵੱਧ ਸੀ। IPR ਖੇਤਰ ਤੋਂ ਬਾਹਰ, ਜੰਗਲੀ ਕਿਸਮ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਕੋਣਾਂ ਦੀ ਵਧੇਰੇ ਇਕਸਾਰ ਵੰਡ ਸੀ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਡੇਲਾ ਗਲੋਬਲ ਮਿਊਟੈਂਟ IPR (ਚਿੱਤਰ 6e) ਵਰਗੇ ਟੈਂਜੈਂਸ਼ੀਅਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਤਰਜੀਹ ਦਿੰਦਾ ਸੀ। ਅਸੀਂ ga2 ਆਕਸੀਡੇਸ (ga2ox) ਕੁਇੰਟਪਲ ਮਿਊਟੈਂਟਸ (ga2ox1-1, ga2ox2-1, ga2ox3-1, ga2ox4-1, ਅਤੇ ga2ox6-2) ਦੇ SAM ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨਾਂ ਦੀ ਸਥਿਤੀ ਨੂੰ ਵੀ ਮਾਪਿਆ, ਇੱਕ GA-ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਮਿਊਟੈਂਟ ਪਿਛੋਕੜ ਜਿਸ ਵਿੱਚ GA ਇਕੱਠਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। GA ਪੱਧਰਾਂ ਵਿੱਚ ਵਾਧੇ ਦੇ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ, ਕੁਇੰਟੁਪਲ ga2ox ਮਿਊਟੈਂਟ ਇਨਫਲੋਰੇਸੈਂਸ ਦਾ SAM Col-0 (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 12a, b) ਨਾਲੋਂ ਵੱਡਾ ਸੀ, ਅਤੇ Col-0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, ਕੁਇੰਟੁਪਲ ga2ox SAM ਨੇ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਕੋਣਾਂ ਦੀ ਇੱਕ ਵੱਖਰੀ ਵੰਡ ਦਿਖਾਈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਕੋਣ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ 50° ਤੋਂ 90° ਤੱਕ ਵਧ ਗਈ, ਭਾਵ ਦੁਬਾਰਾ ਟੈਂਜੈਂਸ਼ੀਅਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨਾਂ ਦਾ ਪੱਖ ਪੂਰਦਾ ਹੈ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 12a–c)। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਅਸੀਂ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਾਂ ਕਿ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਅਤੇ GA ਇਕੱਠਾ ਹੋਣ ਦੀ ਸੰਵਿਧਾਨਕ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ IPR ਅਤੇ ਬਾਕੀ SAM ਵਿੱਚ ਲੇਟਰਲ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ।
a, b ਕਨਫੋਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ PI-ਸਟੇਨਡ Ler (a) ਅਤੇ ਗਲੋਬਲ ਡੇਲਾ ਮਿਊਟੈਂਟ (b) SAM ਦੀ L1 ਪਰਤ ਦਾ 3D ਵਿਜ਼ੂਅਲਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ। 10-ਘੰਟੇ ਦੀ ਮਿਆਦ ਵਿੱਚ SAM (ਪਰ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਅਮ ਨਹੀਂ) ਵਿੱਚ ਬਣੀਆਂ ਨਵੀਆਂ ਸੈੱਲ ਕੰਧਾਂ ਨੂੰ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਕੋਣ ਮੁੱਲਾਂ ਅਨੁਸਾਰ ਦਿਖਾਇਆ ਅਤੇ ਰੰਗਿਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਇਨਸੈੱਟ 0 h 'ਤੇ SAM ਦਿਖਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਰੰਗ ਪੱਟੀ ਹੇਠਲੇ ਸੱਜੇ ਕੋਨੇ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ। (b) ਵਿੱਚ ਤੀਰ ਗਲੋਬਲ ਡੇਲਾ ਮਿਊਟੈਂਟ ਵਿੱਚ ਇਕਸਾਰ ਸੈੱਲ ਫਾਈਲਾਂ ਦੀ ਇੱਕ ਉਦਾਹਰਣ ਵੱਲ ਇਸ਼ਾਰਾ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਪ੍ਰਯੋਗ ਨੂੰ ਸਮਾਨ ਨਤੀਜਿਆਂ ਨਾਲ ਦੋ ਵਾਰ ਦੁਹਰਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ce ਪੂਰੇ SAM (d), IPR (e), ਅਤੇ Ler ਅਤੇ ਗਲੋਬਲ ਡੇਲਾ ਵਿਚਕਾਰ ਗੈਰ-IPR (f) ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨਾਂ ਦੀ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ ਵੰਡ ਦੀ ਤੁਲਨਾ। P ਮੁੱਲ ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਕੋਲਮੋਗੋਰੋਵ-ਸਮਿਰਨੋਵ ਟੈਸਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। f, g ਕੋਲ-0 (i) ਅਤੇ pCUC2::gai-1-VENUS (j) ਟ੍ਰਾਂਸਜੇਨਿਕ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ PI-ਸਟੇਨਡ SAM ਦੇ ਕਨਫੋਕਲ ਚਿੱਤਰਾਂ ਦਾ 3D ਵਿਜ਼ੂਅਲਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ। ਪੈਨਲ (a, b) 10 ਘੰਟਿਆਂ ਦੇ ਅੰਦਰ SAM ਵਿੱਚ ਬਣੀਆਂ ਨਵੀਆਂ ਸੈੱਲ ਕੰਧਾਂ (ਪਰ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਆ ਨਹੀਂ) ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਪ੍ਰਯੋਗ ਨੂੰ ਦੋ ਵਾਰ ਦੁਹਰਾਇਆ ਗਿਆ ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਇੱਕੋ ਜਿਹੇ ਸਨ। h–j ਪੂਰੇ SAM (h), IPR (i) ਅਤੇ ਗੈਰ-IPR (j) ਵਿੱਚ Col-0 ਅਤੇ pCUC2::gai-1-VENUS ਪੌਦਿਆਂ ਵਿਚਕਾਰ ਸਥਿਤ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨਾਂ ਦੀ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ ਵੰਡ ਦੀ ਤੁਲਨਾ। P ਮੁੱਲ ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਕੋਲਮੋਗੋਰੋਵ-ਸਮਿਰਨੋਵ ਟੈਸਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।
ਅਸੀਂ ਅੱਗੇ IPR ਵਿੱਚ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ। ਇਸ ਉਦੇਸ਼ ਲਈ, ਅਸੀਂ VENUS (pCUC2::gai-1-VENUS ਲਾਈਨ ਵਿੱਚ) ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਇੱਕ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਨਕਾਰਾਤਮਕ gai-1 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਚਲਾਉਣ ਲਈ cotyledon cup 2 (CUC2) ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ। ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੇ SAM ਵਿੱਚ, CUC2 ਪ੍ਰਮੋਟਰ P4 ਤੋਂ ਬਾਅਦ SAM ਵਿੱਚ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ IPRs ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਚਲਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਬਾਰਡਰ ਸੈੱਲ ਵੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ, ਅਤੇ pCUC2::gai-1-VENUS ਪੌਦਿਆਂ ਵਿੱਚ ਵੀ ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ ਦੀ ਖਾਸ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ (ਹੇਠਾਂ ਦੇਖੋ)। PCUC2::gai-1-VENUS ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ SAM ਜਾਂ IPR ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਕੋਣਾਂ ਦੀ ਵੰਡ ਜੰਗਲੀ ਕਿਸਮ ਦੇ ਨਾਲੋਂ ਕਾਫ਼ੀ ਵੱਖਰੀ ਨਹੀਂ ਸੀ, ਹਾਲਾਂਕਿ ਅਚਾਨਕ ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ ਇਹਨਾਂ ਪੌਦਿਆਂ ਵਿੱਚ IPR ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸੈੱਲ 80-90° ਦੀ ਉੱਚ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ 'ਤੇ ਵੰਡੇ ਗਏ ਹਨ (ਚਿੱਤਰ 6f-j)।
ਇਹ ਸੁਝਾਅ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਕਿ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਦੀ ਦਿਸ਼ਾ SAM ਦੀ ਜਿਓਮੈਟਰੀ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਖਾਸ ਕਰਕੇ ਟਿਸ਼ੂ ਵਕਰਤਾ ਦੁਆਰਾ ਪੈਦਾ ਹੋਣ ਵਾਲੇ ਤਣਾਅ ਦੇ ਤਣਾਅ 'ਤੇ। ਇਸ ਲਈ ਅਸੀਂ ਪੁੱਛਿਆ ਕਿ ਕੀ SAM ਦੀ ਸ਼ਕਲ ਡੇਲਾ ਗਲੋਬਲ ਮਿਊਟੈਂਟ ਅਤੇ pCUC2::gai-1-VENUS ਪੌਦਿਆਂ ਵਿੱਚ ਬਦਲੀ ਗਈ ਸੀ। ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ12, ਡੇਲਾ ਗਲੋਬਲ ਮਿਊਟੈਂਟ SAM ਦਾ ਆਕਾਰ ਜੰਗਲੀ ਕਿਸਮ ਨਾਲੋਂ ਵੱਡਾ ਸੀ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 13a, b, d)। CLV3 ਅਤੇ STM RNA ਦੇ ਇਨ ਸੀਟੂ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਨੇ ਡੇਲਾ ਮਿਊਟੈਂਟਾਂ ਵਿੱਚ ਮੈਰੀਸਟਮ ਵਿਸਥਾਰ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ ਅਤੇ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲ ਨਿਚ ਦੇ ਲੇਟਰਲ ਵਿਸਥਾਰ ਨੂੰ ਅੱਗੇ ਦਿਖਾਇਆ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 13e, f, h, i)। ਹਾਲਾਂਕਿ, SAM ਵਕਰਤਾ ਦੋਵਾਂ ਜੀਨੋਟਾਈਪਾਂ ਵਿੱਚ ਸਮਾਨ ਸੀ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 13k, m, n, p)। ਅਸੀਂ ਜੰਗਲੀ ਕਿਸਮ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਵਕਰਤਾ ਵਿੱਚ ਬਦਲਾਅ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ gai-t6 rga-t2 rgl1-1 rgl2-1 della quadruple mutant ਵਿੱਚ ਆਕਾਰ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸਮਾਨ ਵਾਧਾ ਦੇਖਿਆ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 13c, d, g, j, l, o, p)। della quadruple mutant ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ ਦੀ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ ਵੀ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਹੋਈ ਸੀ, ਪਰ della monolithic mutant (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 12d–f) ਨਾਲੋਂ ਘੱਟ ਹੱਦ ਤੱਕ। ਇਹ ਖੁਰਾਕ ਪ੍ਰਭਾਵ, ਵਕਰਤਾ 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਘਾਟ ਦੇ ਨਾਲ, ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ Della quadruple mutant ਵਿੱਚ ਬਕਾਇਆ RGL3 ਗਤੀਵਿਧੀ DELLA ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਕਾਰਨ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਨੂੰ ਸੀਮਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਲੇਟਰਲ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ SAM ਜਿਓਮੈਟਰੀ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦੀ ਬਜਾਏ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦੇ ਜਵਾਬ ਵਿੱਚ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ। ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਉੱਪਰ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ, CUC2 ਪ੍ਰਮੋਟਰ P4 ਤੋਂ ਸ਼ੁਰੂ ਹੋ ਕੇ SAM ਵਿੱਚ IPR ਸਮੀਕਰਨ ਚਲਾਉਂਦਾ ਹੈ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 14a, b), ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਉਲਟ, pCUC2::gai-1-VENUS SAM ਦਾ ਆਕਾਰ ਘਟਿਆ ਪਰ ਵਕਰ ਵੱਧ ਸੀ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 14c–h)। pCUC2::gai-1-VENUS SAM ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਵਿੱਚ ਇਸ ਤਬਦੀਲੀ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਜੰਗਲੀ ਕਿਸਮ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਮਕੈਨੀਕਲ ਤਣਾਅ ਦੀ ਇੱਕ ਵੱਖਰੀ ਵੰਡ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਉੱਚ ਘੇਰਾਬੰਦੀ ਵਾਲੇ ਤਣਾਅ SAM ਕੇਂਦਰ ਤੋਂ ਥੋੜ੍ਹੀ ਦੂਰੀ 'ਤੇ ਸ਼ੁਰੂ ਹੁੰਦੇ ਹਨ47। ਵਿਕਲਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ, pCUC2::gai-1-VENUS SAM ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਟ੍ਰਾਂਸਜੀਨ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ48 ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਖੇਤਰੀ ਮਕੈਨੀਕਲ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਹੋ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ। ਦੋਵਾਂ ਮਾਮਲਿਆਂ ਵਿੱਚ, ਇਹ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ ਅੰਸ਼ਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਆਫਸੈੱਟ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਇਸ ਸੰਭਾਵਨਾ ਨੂੰ ਵਧਾ ਕੇ ਕਿ ਸੈੱਲ ਘੇਰਾਬੰਦੀ/ਟ੍ਰਾਂਸਵਰਸ ਸਥਿਤੀ ਵਿੱਚ ਵੰਡੇ ਜਾਣਗੇ, ਸਾਡੇ ਨਿਰੀਖਣਾਂ ਦੀ ਵਿਆਖਿਆ ਕਰਦੇ ਹੋਏ।
ਇਕੱਠੇ ਮਿਲ ਕੇ, ਸਾਡਾ ਡੇਟਾ ਇਸ ਗੱਲ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਉੱਚ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ IPR ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ ਦੇ ਲੇਟਰਲ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸਰਗਰਮ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਉਹ ਇਹ ਵੀ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਮੈਰੀਸਟਮ ਵਕਰਤਾ IPR ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ ਦੇ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਵੀ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।
IPR ਵਿੱਚ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ ਦਾ ਟ੍ਰਾਂਸਵਰਸ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ, ਉੱਚ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ GA ਸੈਲੂਲਰ ਸੰਗਠਨ ਨੂੰ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕਰਨ ਲਈ SAM ਦੇ ਅੰਦਰ ਐਪੀਡਰਰਮਿਸ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਰੇਡੀਅਲ ਸੈੱਲ ਫਾਈਲ ਨੂੰ ਪਹਿਲਾਂ ਤੋਂ ਸੰਗਠਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਐਪੀਡਰਮਲ ਇੰਟਰਨੋਡ ਵਿੱਚ ਪਾਇਆ ਜਾਵੇਗਾ। ਦਰਅਸਲ, ਅਜਿਹੀਆਂ ਸੈੱਲ ਫਾਈਲਾਂ ਡੇਲਾ ਗਲੋਬਲ ਮਿਊਟੈਂਟਸ (ਚਿੱਤਰ 6b) ਦੇ SAM ਚਿੱਤਰਾਂ ਵਿੱਚ ਅਕਸਰ ਦਿਖਾਈ ਦਿੰਦੀਆਂ ਸਨ। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, SAM ਵਿੱਚ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਦੇ ਸਥਾਨਿਕ ਪੈਟਰਨ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਕਾਰਜ ਦੀ ਹੋਰ ਪੜਚੋਲ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਵਾਈਲਡ-ਟਾਈਪ (Ler ਅਤੇ Col-0), ਡੇਲਾ ਗਲੋਬਲ ਮਿਊਟੈਂਟਸ, ਅਤੇ pCUC2::gai-1-VENUS ਟ੍ਰਾਂਸਜੇਨਿਕ ਪੌਦਿਆਂ ਵਿੱਚ IPR ਵਿੱਚ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਸਥਾਨਿਕ ਸੰਗਠਨ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨ ਲਈ ਟਾਈਮ-ਲੈਪਸ ਇਮੇਜਿੰਗ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ।
ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ qmRGA ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ IPR ਵਿੱਚ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ P1/P2 ਤੋਂ ਵਧੀ ਅਤੇ P4 'ਤੇ ਸਿਖਰ 'ਤੇ ਪਹੁੰਚ ਗਈ, ਅਤੇ ਇਹ ਪੈਟਰਨ ਸਮੇਂ ਦੇ ਨਾਲ ਸਥਿਰ ਰਿਹਾ (ਚਿੱਤਰ 4a–f ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 8c–f, k)। ਵਧਦੇ GA ਸਿਗਨਲ ਨਾਲ IPR ਵਿੱਚ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਸਥਾਨਿਕ ਸੰਗਠਨ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਪਹਿਲੇ ਨਿਰੀਖਣ ਤੋਂ 34 ਘੰਟਿਆਂ ਬਾਅਦ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤੇ ਗਏ ਵਿਕਾਸ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ P4 ਦੇ ਉੱਪਰ ਅਤੇ ਪਾਸਿਆਂ 'ਤੇ Ler IPR ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਲੇਬਲ ਕੀਤਾ, ਭਾਵ, ਦੋ ਤੋਂ ਵੱਧ ਪਲਾਸਟੀਡ ਸਮੇਂ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਸਾਨੂੰ P1/P2 ਤੋਂ P4 ਤੱਕ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਅਮ ਵਿਕਾਸ ਦੌਰਾਨ IPR ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕਰਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਮਿਲਦੀ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਤਿੰਨ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਰੰਗਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ: ਉਹਨਾਂ ਸੈੱਲਾਂ ਲਈ ਪੀਲਾ ਜੋ P4 ਦੇ ਨੇੜੇ ਪ੍ਰਾਈਮੋਰਡੀਅਮ ਵਿੱਚ ਏਕੀਕ੍ਰਿਤ ਸਨ, ਉਹਨਾਂ ਲਈ ਹਰਾ ਜੋ IPR ਵਿੱਚ ਸਨ, ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਲਈ ਜਾਮਨੀ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੇ ਦੋਵਾਂ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ ਹਿੱਸਾ ਲਿਆ (ਚਿੱਤਰ 7a–c)। t0 (0 h) 'ਤੇ, IPR ਸੈੱਲਾਂ ਦੀਆਂ 1–2 ਪਰਤਾਂ P4 ਦੇ ਸਾਹਮਣੇ ਦਿਖਾਈ ਦੇ ਰਹੀਆਂ ਸਨ (ਚਿੱਤਰ 7a)। ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਉਮੀਦ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਸੀ, ਜਦੋਂ ਇਹ ਸੈੱਲ ਵੰਡੇ ਜਾਂਦੇ ਸਨ, ਤਾਂ ਉਹਨਾਂ ਨੇ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਵਰਸ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ (ਚਿੱਤਰ 7a–c) ਰਾਹੀਂ ਅਜਿਹਾ ਕੀਤਾ। Col-0 SAM (P3 'ਤੇ ਧਿਆਨ ਕੇਂਦ੍ਰਤ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਜਿਸਦਾ ਬਾਰਡਰ Ler ਵਿੱਚ P4 ਦੇ ਸਮਾਨ ਫੋਲਡ ਹੁੰਦਾ ਹੈ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ਹਾਲਾਂਕਿ ਇਸ ਜੀਨੋਟਾਈਪ ਵਿੱਚ ਫੁੱਲਾਂ ਦੀ ਬਾਰਡਰ 'ਤੇ ਬਣੇ ਫੋਲਡ ਨੇ IPR ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਹੋਰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਲੁਕਾ ਦਿੱਤਾ (ਚਿੱਤਰ 7g–i)। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, IPR ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪੈਟਰਨ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਰੇਡੀਅਲ ਕਤਾਰਾਂ ਵਿੱਚ ਪਹਿਲਾਂ ਤੋਂ ਸੰਗਠਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਇੰਟਰਨੋਡਾਂ ਵਿੱਚ। ਰੇਡੀਅਲ ਕਤਾਰਾਂ ਦਾ ਸੰਗਠਨ ਅਤੇ ਲਗਾਤਾਰ ਅੰਗਾਂ ਵਿਚਕਾਰ IPR ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਸਥਾਨੀਕਰਨ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਇਹ ਸੈੱਲ ਇੰਟਰਨੋਡਲ ਪ੍ਰੋਜੇਨਿਟਰ ਹਨ।
ਇੱਥੇ, ਅਸੀਂ ਇੱਕ ਰੇਸ਼ੋਮੈਟ੍ਰਿਕ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਬਾਇਓਸੈਂਸਰ, qmRGA ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਹੈ, ਜੋ GA ਅਤੇ GA ਰੀਸੈਪਟਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੀ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਮੈਪਿੰਗ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਜਦੋਂ ਕਿ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਮਾਰਗਾਂ ਵਿੱਚ ਦਖਲਅੰਦਾਜ਼ੀ ਨੂੰ ਘੱਟ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸੈਲੂਲਰ ਪੱਧਰ 'ਤੇ GA ਫੰਕਸ਼ਨ ਬਾਰੇ ਜਾਣਕਾਰੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਉਦੇਸ਼ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਇੱਕ ਸੋਧਿਆ ਹੋਇਆ DELLA ਪ੍ਰੋਟੀਨ, mRGA ਬਣਾਇਆ ਹੈ, ਜਿਸਨੇ DELLA ਇੰਟਰਐਕਸ਼ਨ ਪਾਰਟਨਰਾਂ ਨੂੰ ਬੰਨ੍ਹਣ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਗੁਆ ਦਿੱਤੀ ਹੈ ਪਰ GA-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਪ੍ਰੋਟੀਓਲਾਈਸਿਸ ਪ੍ਰਤੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ। qmRGA GA ਪੱਧਰਾਂ ਵਿੱਚ ਬਾਹਰੀ ਅਤੇ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਦੋਵਾਂ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦਾ ਜਵਾਬ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਗਤੀਸ਼ੀਲ ਸੰਵੇਦਕ ਗੁਣ ਵਿਕਾਸ ਦੌਰਾਨ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਵਿੱਚ ਸਪੇਸੀਓਟੈਂਪੋਰਲ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦੇ ਮੁਲਾਂਕਣ ਨੂੰ ਸਮਰੱਥ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ। qmRGA ਇੱਕ ਬਹੁਤ ਹੀ ਲਚਕਦਾਰ ਸਾਧਨ ਵੀ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਇਸਨੂੰ ਇਸਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਲਈ ਵਰਤੇ ਗਏ ਪ੍ਰਮੋਟਰ (ਜੇਕਰ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੋਵੇ) ਨੂੰ ਬਦਲ ਕੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਮਾਰਗ ਦੀ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਪ੍ਰਕਿਰਤੀ ਅਤੇ ਐਂਜੀਓਸਪਰਮਜ਼ ਵਿੱਚ PFYRE ਮੋਟਿਫ ਨੂੰ ਦਿੱਤੇ ਜਾਣ 'ਤੇ, ਇਹ ਹੋਰ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਹੋਣ ਦੀ ਸੰਭਾਵਨਾ ਹੈ22। ਇਸ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਚੌਲਾਂ ਦੇ SLR1 DELLA ਪ੍ਰੋਟੀਨ (HYY497AAA) ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸਮਾਨ ਪਰਿਵਰਤਨ SLR1 ਦੀ ਵਿਕਾਸ ਦਬਾਉਣ ਵਾਲੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਦਬਾਉਣ ਲਈ ਵੀ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜਦੋਂ ਕਿ ਇਸਦੇ GA-ਵਿਚੋਲੇ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਥੋੜ੍ਹਾ ਜਿਹਾ ਘਟਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ, mRGA23 ਦੇ ਸਮਾਨ। ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਅਰਬੀਡੋਪਸਿਸ ਵਿੱਚ ਹਾਲ ਹੀ ਦੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ PFYRE ਡੋਮੇਨ (S474L) ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸਿੰਗਲ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ ਪਰਿਵਰਤਨ ਨੇ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਫੈਕਟਰ ਪਾਰਟਨਰਾਂ ਨਾਲ ਇੰਟਰੈਕਟ ਕਰਨ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕੀਤੇ ਬਿਨਾਂ RGA ਦੀ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਬਦਲ ਦਿੱਤਾ। ਹਾਲਾਂਕਿ ਇਹ ਪਰਿਵਰਤਨ mRGA ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ 3 ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ ਬਦਲਾਂ ਦੇ ਬਹੁਤ ਨੇੜੇ ਹੈ, ਸਾਡੇ ਅਧਿਐਨ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਇਹ ਦੋ ਪਰਿਵਰਤਨ DELLA ਦੀਆਂ ਵੱਖਰੀਆਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਨੂੰ ਬਦਲਦੇ ਹਨ। ਹਾਲਾਂਕਿ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਫੈਕਟਰ ਪਾਰਟਨਰ DELLA26,51 ਦੇ LHR1 ਅਤੇ SAW ਡੋਮੇਨਾਂ ਨਾਲ ਜੁੜਦੇ ਹਨ, PFYRE ਡੋਮੇਨ ਵਿੱਚ ਕੁਝ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ ਇਹਨਾਂ ਪਰਸਪਰ ਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਸਥਿਰ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ਇੰਟਰਨੋਡ ਵਿਕਾਸ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਆਰਕੀਟੈਕਚਰ ਅਤੇ ਉਪਜ ਸੁਧਾਰ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਹੈ। qmRGA ਨੇ IPR ਇੰਟਰਨੋਡ ਪ੍ਰੋਜੇਨਿਟਰ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਉੱਚ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦਾ ਖੁਲਾਸਾ ਕੀਤਾ। ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਇਮੇਜਿੰਗ ਅਤੇ ਜੈਨੇਟਿਕਸ ਨੂੰ ਜੋੜ ਕੇ, ਅਸੀਂ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਪੈਟਰਨ SAM ਐਪੀਡਰਿਮਸ ਵਿੱਚ ਗੋਲਾਕਾਰ/ਟ੍ਰਾਂਸਵਰਸ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ ਨੂੰ ਸੁਪਰਇੰਪੋਜ਼ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਇੰਟਰਨੋਡ ਵਿਕਾਸ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਸੰਗਠਨ ਨੂੰ ਆਕਾਰ ਦਿੰਦੇ ਹਨ। ਵਿਕਾਸ ਦੌਰਾਨ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ ਦੇ ਕਈ ਰੈਗੂਲੇਟਰਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ52,53। ਸਾਡਾ ਕੰਮ ਇੱਕ ਸਪੱਸ਼ਟ ਉਦਾਹਰਣ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ ਕਿ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਇਸ ਸੈਲੂਲਰ ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਨੂੰ ਕਿਵੇਂ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ। DELLA ਪ੍ਰੀਫੋਲਡਿੰਗ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਕੰਪਲੈਕਸਾਂ41 ਨਾਲ ਇੰਟਰੈਕਟ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਕੋਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ40,41,54,55 ਨੂੰ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਕੇ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਅਚਾਨਕ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ SAM ਵਿੱਚ, ਉੱਚ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦਾ ਸਹਿ-ਸੰਬੰਧ ਸੈੱਲ ਲੰਬਾਈ ਜਾਂ ਵੰਡ ਨਹੀਂ ਸੀ, ਪਰ ਸਿਰਫ ਵਿਕਾਸ ਐਨੀਸੋਟ੍ਰੋਪੀ ਸੀ, ਜੋ ਕਿ IPR ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਦੀ ਦਿਸ਼ਾ 'ਤੇ GA ਦੇ ਸਿੱਧੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਅਸੀਂ ਇਸ ਗੱਲ ਨੂੰ ਰੱਦ ਨਹੀਂ ਕਰ ਸਕਦੇ ਕਿ ਇਹ ਪ੍ਰਭਾਵ ਅਸਿੱਧਾ ਵੀ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ GA-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਸੈੱਲ ਕੰਧ ਨਰਮ ਕਰਨ ਦੁਆਰਾ 56। ਸੈੱਲ ਕੰਧ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਬਦਲਾਅ ਮਕੈਨੀਕਲ ਤਣਾਅ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ57,58, ਜੋ ਕਿ ਕੋਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲਜ਼ ਦੇ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਕੇ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ ਦੀ ਸਥਿਤੀ ਨੂੰ ਵੀ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ39,46,59। GA-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਮਕੈਨੀਕਲ ਤਣਾਅ ਅਤੇ GA ਦੁਆਰਾ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ ਦੇ ਸਿੱਧੇ ਨਿਯਮਨ ਦੇ ਸੰਯੁਕਤ ਪ੍ਰਭਾਵ ਇੰਟਰਨੋਡਾਂ ਨੂੰ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕਰਨ ਲਈ IPR ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਓਰੀਐਂਟੇਸ਼ਨ ਦੇ ਇੱਕ ਖਾਸ ਪੈਟਰਨ ਨੂੰ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਇਸ ਵਿਚਾਰ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ ਹੋਰ ਅਧਿਐਨਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ। ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਪਿਛਲੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਇੰਟਰਨੋਡ ਗਠਨ ਦੇ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਿੱਚ DELLA-ਇੰਟਰੈਕਟਿੰਗ ਪ੍ਰੋਟੀਨ TCP14 ਅਤੇ 15 ਦੀ ਮਹੱਤਤਾ ਨੂੰ ਉਜਾਗਰ ਕੀਤਾ ਹੈ60,61 ਅਤੇ ਇਹ ਕਾਰਕ BREVIPEDICELLUS (BP) ਅਤੇ PENNYWISE (PNY) ਦੇ ਨਾਲ ਮਿਲ ਕੇ GA ਦੀ ਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਵਿਚੋਲਗੀ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਇੰਟਰਨੋਡ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ GA ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦੇ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ2,62। ਇਹ ਦੇਖਦੇ ਹੋਏ ਕਿ DELLAs ਬ੍ਰੈਸਿਨੋਸਟੀਰੌਇਡ, ਈਥੀਲੀਨ, ਜੈਸਮੋਨਿਕ ਐਸਿਡ, ਅਤੇ ਐਬਸਿਸਿਕ ਐਸਿਡ (ABA) ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਮਾਰਗਾਂ ਨਾਲ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪਾਉਂਦੇ ਹਨ63,64 ਅਤੇ ਇਹ ਹਾਰਮੋਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਸਥਿਤੀ65 ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਸਥਿਤੀ 'ਤੇ GA ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ ਹੋਰ ਹਾਰਮੋਨਾਂ ਦੁਆਰਾ ਵੀ ਵਿਚੋਲਗੀ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।
ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਸਾਇਟੋਲੋਜੀਕਲ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਇੰਟਰਨੋਡ ਵਿਕਾਸ ਲਈ ਅਰਬੀਡੋਪਸਿਸ SAM ਦੇ ਅੰਦਰੂਨੀ ਅਤੇ ਬਾਹਰੀ ਦੋਵੇਂ ਖੇਤਰ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹਨ2,42। ਇਹ ਤੱਥ ਕਿ GA ਅੰਦਰੂਨੀ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮੀ ਨਾਲ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ12 SAM ਵਿੱਚ ਮੈਰੀਸਟਮ ਅਤੇ ਇੰਟਰਨੋਡ ਆਕਾਰ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ GA ਦੇ ਦੋਹਰੇ ਕਾਰਜ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਦਿਸ਼ਾਤਮਕ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਦਾ ਪੈਟਰਨ ਅੰਦਰੂਨੀ SAM ਟਿਸ਼ੂ ਵਿੱਚ ਵੀ ਸਖ਼ਤੀ ਨਾਲ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਨਿਯਮ ਸਟੈਮ ਵਾਧੇ ਲਈ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ52। ਇਹ ਜਾਂਚ ਕਰਨਾ ਦਿਲਚਸਪ ਹੋਵੇਗਾ ਕਿ ਕੀ GA ਅੰਦਰੂਨੀ SAM ਸੰਗਠਨ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਪਲੇਨ ਨੂੰ ਦਿਸ਼ਾ ਦੇਣ ਵਿੱਚ ਵੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ SAM ਦੇ ਅੰਦਰ ਇੰਟਰਨੋਡਾਂ ਦੇ ਨਿਰਧਾਰਨ ਅਤੇ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਸਮਕਾਲੀ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਪੌਦਿਆਂ ਨੂੰ ਮਿੱਟੀ ਵਿੱਚ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਜਾਂ 1x ਮੁਰਾਸ਼ੀਗੇ-ਸਕੂਗ (ਐਮਐਸ) ਮਾਧਿਅਮ (ਡੂਚੇਫਾ) ਵਿੱਚ 1% ਸੁਕਰੋਜ਼ ਅਤੇ 1% ਅਗਰ (ਸਿਗਮਾ) ਨਾਲ ਪੂਰਕ ਕਰਕੇ ਮਿਆਰੀ ਹਾਲਤਾਂ (16 ਘੰਟੇ ਰੋਸ਼ਨੀ, 22 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ) ਵਿੱਚ ਉਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਹਾਈਪੋਕੋਟਾਈਲ ਅਤੇ ਜੜ੍ਹਾਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੂੰ ਛੱਡ ਕੇ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚ ਪੌਦੇ ਨਿਰੰਤਰ ਰੌਸ਼ਨੀ ਅਤੇ 22 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਵਿੱਚ ਲੰਬਕਾਰੀ ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਉਗਾਏ ਗਏ ਸਨ। ਨਾਈਟ੍ਰੇਟ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ, ਪੌਦਿਆਂ ਨੂੰ ਸੋਧੇ ਹੋਏ ਐਮਐਸ ਮਾਧਿਅਮ (ਬਾਇਓਵਰਲਡ ਪਲਾਂਟ ਮਾਧਿਅਮ) 'ਤੇ ਉਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜੋ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਨਾਈਟ੍ਰੇਟ (0 ਜਾਂ 10 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਕੇਐਨਓ3), 0.5 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਐਨਐਚ4-ਸਕਸੀਨੇਟ, 1% ਸੁਕਰੋਜ਼ ਅਤੇ 1% ਏ-ਅਗਰ (ਸਿਗਮਾ) ਨਾਲ ਪੂਰਕ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
pDONR221 ਵਿੱਚ ਪਾਏ ਗਏ GID1a cDNA ਨੂੰ pDONR P4-P1R-pUBQ10 ਅਤੇ pDONR P2R-P3-mCherry ਨਾਲ pB7m34GW ਵਿੱਚ ਦੁਬਾਰਾ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਤਾਂ ਜੋ pUBQ10::GID1a-mCherry ਪੈਦਾ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕੇ। pDONR221 ਵਿੱਚ ਪਾਏ ਗਏ IDD2 DNA ਨੂੰ p35S:IDD2-RFP ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ pB7RWG266 ਵਿੱਚ ਦੁਬਾਰਾ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ। pGID1b::2xmTQ2-GID1b ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਲਈ, GID1b ਕੋਡਿੰਗ ਖੇਤਰ ਦੇ ਉੱਪਰ ਵੱਲ ਇੱਕ 3.9 kb ਟੁਕੜਾ ਅਤੇ GID1b cDNA (1.3 kb) ਅਤੇ ਟਰਮੀਨੇਟਰ (3.4 kb) ਵਾਲਾ ਇੱਕ 4.7 kb ਟੁਕੜਾ ਪਹਿਲਾਂ ਸਪਲੀਮੈਂਟਰੀ ਟੇਬਲ 3 ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਵਧਾਇਆ ਗਿਆ ਅਤੇ ਫਿਰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ pDONR P4-P1R (ਥਰਮੋ ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ) ਅਤੇ pDONR P2R-P3 (ਥਰਮੋ ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ) ਵਿੱਚ ਪਾਇਆ ਗਿਆ, ਅਤੇ ਅੰਤ ਵਿੱਚ ਗੇਟਵੇ ਕਲੋਨਿੰਗ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ pGreen 012567 ਟਾਰਗੇਟ ਵੈਕਟਰ ਵਿੱਚ pDONR221 2xmTQ268 ਨਾਲ ਦੁਬਾਰਾ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ। pCUC2::LSSmOrange ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ, CUC2 ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਕ੍ਰਮ (ATG ਦਾ 3229 bp ਅੱਪਸਟ੍ਰੀਮ) ਜਿਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ N7 ਨਿਊਕਲੀਅਰ ਲੋਕਾਲਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਸਿਗਨਲ ਅਤੇ NOS ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਟਰਮੀਨੇਟਰ ਦੇ ਨਾਲ ਵੱਡੇ ਸਟੋਕਸ-ਸ਼ਿਫਟਡ mOrange (LSSmOrange)69 ਦੇ ਕੋਡਿੰਗ ਕ੍ਰਮ ਨੂੰ ਗੇਟਵੇ 3-ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟ ਰੀਕੰਬੀਨੇਸ਼ਨ ਸਿਸਟਮ (ਇਨਵਿਟ੍ਰੋਜਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ pGreen kanamycin ਟਾਰਗੇਟਿੰਗ ਵੈਕਟਰ ਵਿੱਚ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਪਲਾਂਟ ਬਾਈਨਰੀ ਵੈਕਟਰ ਨੂੰ ਐਗਰੋਬੈਕਟੀਰੀਅਮ ਟਿਊਮੇਫੇਸੀਅਨ ਸਟ੍ਰੇਨ GV3101 ਵਿੱਚ ਪੇਸ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਐਗਰੋਬੈਕਟੀਰੀਅਮ ਘੁਸਪੈਠ ਵਿਧੀ ਦੁਆਰਾ ਨਿਕੋਟੀਆਨਾ ਬੈਂਥਮੀਆਨਾ ਪੱਤਿਆਂ ਵਿੱਚ ਅਤੇ ਫੁੱਲਦਾਰ ਡਿਪ ਵਿਧੀ ਦੁਆਰਾ ਅਰਬੀਡੋਪਸਿਸ ਥਾਲੀਆਨਾ ਕੋਲ-0 ਵਿੱਚ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਪੇਸ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। pUBQ10::qmRGA pUBQ10::GID1a-mCherry ਅਤੇ pCLV3::mCherry-NLS qmRGA ਨੂੰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਸੰਬੰਧਿਤ ਕਰਾਸਾਂ ਦੇ F3 ਅਤੇ F1 ਪ੍ਰਜਨੀਆਂ ਤੋਂ ਅਲੱਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
RNA ਇਨ ਸੀਟੂ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਲਗਭਗ 1 ਸੈਂਟੀਮੀਟਰ ਲੰਬੇ ਸ਼ੂਟ ਟਿਪਸ72 'ਤੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਤੁਰੰਤ FAA ਘੋਲ (3.7% ਫਾਰਮਾਲਡੀਹਾਈਡ, 5% ਐਸੀਟਿਕ ਐਸਿਡ, 50% ਈਥਾਨੌਲ) ਵਿੱਚ ਫਿਕਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜੋ 4 °C ਤੱਕ ਪਹਿਲਾਂ ਤੋਂ ਠੰਢਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। 2 × 15 ਮਿੰਟ ਵੈਕਿਊਮ ਟ੍ਰੀਟਮੈਂਟ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਫਿਕਸੇਟਿਵ ਨੂੰ ਬਦਲ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਰਾਤੋ-ਰਾਤ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। GID1a, GID1b, GID1c, GAI, RGL1, RGL2, ਅਤੇ RGL3 cDNAs ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ 3′-UTRs ਲਈ ਐਂਟੀਸੈਂਸ ਪ੍ਰੋਬਾਂ ਨੂੰ ਰੋਜ਼ੀਅਰ ਐਟ ਅਲ ਦੁਆਰਾ ਦੱਸੇ ਗਏ ਪੂਰਕ ਸਾਰਣੀ 3 ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਏ ਗਏ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।73। ਡਿਗੌਕਸੀਜੇਨਿਨ-ਲੇਬਲ ਵਾਲੀਆਂ ਪ੍ਰੋਬਾਂ ਨੂੰ ਡਿਗੌਕਸੀਜੇਨਿਨ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ (3000-ਫੋਲਡ ਡਿਲਿਊਸ਼ਨ; ਰੋਸ਼, ਕੈਟਾਲਾਗ ਨੰਬਰ: 11 093 274 910) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਇਮਯੂਨੋਡੈਕਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ 5-ਬਰੋਮੋ-4-ਕਲੋਰੋ-3-ਇੰਡੋਲਾਈਲ ਫਾਸਫੇਟ (BCIP, 250-ਫੋਲਡ ਡਿਲਿਊਸ਼ਨ)/ਨਾਈਟਰੋਬਲੂ ਟੈਟਰਾਜ਼ੋਲਿਅਮ (NBT, 200-ਫੋਲਡ ਡਿਲਿਊਸ਼ਨ) ਘੋਲ ਨਾਲ ਰੰਗਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।