ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਸੂਖਮ ਟਿਊਬਿਊਲਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਨਵੇਂ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਵਾਲੇ ਵਜੋਂ ਉਰਸਾ ਮੋਨੋਆਮਾਈਡਜ਼ ਦੀ ਖੋਜ, ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਅਤੇ ਕਾਰਜਸ਼ੀਲ ਸੁਧਾਰ।

Nature.com 'ਤੇ ਜਾਣ ਲਈ ਧੰਨਵਾਦ। ਤੁਹਾਡੇ ਦੁਆਰਾ ਵਰਤੇ ਜਾ ਰਹੇ ਬ੍ਰਾਊਜ਼ਰ ਦੇ ਸੰਸਕਰਣ ਵਿੱਚ ਸੀਮਤ CSS ਸਮਰਥਨ ਹੈ। ਵਧੀਆ ਨਤੀਜਿਆਂ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਿਫ਼ਾਰਿਸ਼ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਤੁਸੀਂ ਆਪਣੇ ਬ੍ਰਾਊਜ਼ਰ ਦੇ ਇੱਕ ਨਵੇਂ ਸੰਸਕਰਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ (ਜਾਂ ਇੰਟਰਨੈੱਟ ਐਕਸਪਲੋਰਰ ਵਿੱਚ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਮੋਡ ਨੂੰ ਅਯੋਗ ਕਰੋ)। ਇਸ ਦੌਰਾਨ, ਨਿਰੰਤਰ ਸਹਾਇਤਾ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਾਈਟ ਨੂੰ ਸਟਾਈਲਿੰਗ ਜਾਂ JavaScript ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਦਿਖਾ ਰਹੇ ਹਾਂ।
ਕੁਦਰਤੀ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੀ ਖੋਜ ਅਤੇ ਲਾਭਦਾਇਕ ਵਰਤੋਂ ਮਨੁੱਖੀ ਜੀਵਨ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਉਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ। ਨਦੀਨਾਂ ਨੂੰ ਕੰਟਰੋਲ ਕਰਨ ਲਈ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਵਾਲੇ ਰਸਾਇਣਾਂ ਨੂੰ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਵੱਖ-ਵੱਖ ਕਿਸਮਾਂ ਦੀਆਂ ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਜ਼ਰੂਰਤ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਕਿਰਿਆ ਦੇ ਨਵੇਂ ਢੰਗਾਂ ਵਾਲੇ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਦੀ ਜ਼ਰੂਰਤ ਹੈ। ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਸਟ੍ਰੈਪਟੋਮਾਈਸਿਸ ਵੇਰੇਨਸਿਸ MK493-CF1 ਤੋਂ ਇੱਕ ਨਾਵਲ N-alkoxypyrole ਮਿਸ਼ਰਣ, coumamonamide ਦੀ ਖੋਜ ਕੀਤੀ ਅਤੇ ਪੂਰੀ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਸਥਾਪਤ ਕੀਤੀ। ਜੈਵਿਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਪਰਖਾਂ ਰਾਹੀਂ, ਅਸੀਂ ਖੋਜ ਕੀਤੀ ਕਿ urs-monoamic ਐਸਿਡ urs-monoamide ਦਾ ਇੱਕ ਸਿੰਥੈਟਿਕ ਇੰਟਰਮੀਡੀਏਟ ਹੈ ਅਤੇ ਇੱਕ ਸੰਭਾਵੀਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਵਾਲਾ. ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਅਸੀਂ ਕਈ ਤਰ੍ਹਾਂ ਦੇ urbenoloxy derivative (UDA) ਵਿਕਸਤ ਕੀਤੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ urbenyloxy derivative (UDA) ਵੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ HeLa ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕੀਤੇ ਬਿਨਾਂ ਉੱਚ ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਨਾਸ਼ਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਇਹ ਵੀ ਪਾਇਆ ਕਿ urmotonic acid derivatives ਪੌਦੇ ਦੇ ਸੂਖਮ ਟਿਊਬਿਊਲਾਂ ਨੂੰ ਵਿਗਾੜਦੇ ਹਨ; ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, KAND ਐਕਟਿਨ ਫਿਲਾਮੈਂਟਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਦੀ ਮੌਤ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ; ਇਹ ਬਹੁਪੱਖੀ ਪ੍ਰਭਾਵ ਜਾਣੇ-ਪਛਾਣੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ ਨਾਲੋਂ ਵੱਖਰੇ ਹਨ ਅਤੇ ursonic acid ਲਈ ਕਾਰਵਾਈ ਦੀ ਇੱਕ ਨਵੀਂ ਵਿਧੀ ਦਾ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਕਿ ਨਵੇਂ ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਫਾਇਦਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਲਾਭਦਾਇਕ ਕੁਦਰਤੀ ਉਤਪਾਦਾਂ ਅਤੇ ਉਨ੍ਹਾਂ ਦੇ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਦੀ ਖੋਜ ਅਤੇ ਵਿਵਹਾਰਕ ਵਰਤੋਂ ਮਨੁੱਖੀ ਜੀਵਨ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਉਣ ਦਾ ਇੱਕ ਸਾਧਨ ਹੈ। ਸੂਖਮ ਜੀਵਾਣੂਆਂ, ਪੌਦਿਆਂ ਅਤੇ ਕੀੜਿਆਂ ਦੁਆਰਾ ਪੈਦਾ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸੈਕੰਡਰੀ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟਸ ਨੇ ਦਵਾਈ ਅਤੇ ਖੇਤੀਬਾੜੀ ਵਿੱਚ ਵੱਡੀਆਂ ਤਰੱਕੀਆਂ ਕੀਤੀਆਂ ਹਨ। ਕੁਦਰਤੀ ਉਤਪਾਦਾਂ ਤੋਂ ਬਹੁਤ ਸਾਰੀਆਂ ਐਂਟੀਬਾਇਓਟਿਕਸ ਅਤੇ ਐਂਟੀ-ਲਿਊਕੇਮੀਆ ਦਵਾਈਆਂ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਹਨ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਕਈ ਕਿਸਮਾਂ ਦੇਕੀਟਨਾਸ਼ਕ, ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕ ਅਤੇ ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਨਾਸ਼ਕ ਖੇਤੀਬਾੜੀ ਵਿੱਚ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਇਹਨਾਂ ਕੁਦਰਤੀ ਉਤਪਾਦਾਂ ਤੋਂ ਕੱਢੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ। ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਆਧੁਨਿਕ ਖੇਤੀਬਾੜੀ ਵਿੱਚ ਫਸਲਾਂ ਦੀ ਪੈਦਾਵਾਰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਨਦੀਨਾਂ ਨੂੰ ਕੰਟਰੋਲ ਕਰਨ ਵਾਲੀਆਂ ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਨਾਸ਼ਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਸਾਧਨ ਹਨ, ਅਤੇ ਕਈ ਕਿਸਮਾਂ ਦੇ ਮਿਸ਼ਰਣ ਪਹਿਲਾਂ ਹੀ ਵਪਾਰਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ। ਪੌਦਿਆਂ ਵਿੱਚ ਕਈ ਸੈਲੂਲਰ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ, ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ ਮੈਟਾਬੋਲਿਜ਼ਮ, ਸੈੱਲ ਕੰਧ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ, ਮਾਈਟੋਸਿਸ ਦਾ ਨਿਯਮ, ਫਾਈਟੋਹਾਰਮੋਨ ਸਿਗਨਲਿੰਗ, ਜਾਂ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ, ਨੂੰ ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਨਾਸ਼ਕਾਂ ਦੇ ਖਾਸ ਨਿਸ਼ਾਨੇ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਮਿਸ਼ਰਣ ਜੋ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਫੰਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕਦੇ ਹਨ, ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਨਾਸ਼ਕਾਂ ਦਾ ਇੱਕ ਆਮ ਵਰਗ ਹੈ ਜੋ ਮਾਈਟੋਟਿਕ ਨਿਯਮਨ2 ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਕੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਸਾਇਟੋਸਕੇਲਟਨ ਦੇ ਹਿੱਸੇ ਹਨ ਅਤੇ ਯੂਕੇਰੀਓਟਿਕ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਹਨ। ਟਿਊਬੂਲਿਨ ਹੇਟਰੋਡਾਈਮਰ ਵਿੱਚ α-ਟਿਊਬੂਲਿਨ ਅਤੇ β-ਟਿਊਬੂਲਿਨ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਰੇਖਿਕ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਪ੍ਰੋਟੋਫਿਲਮੈਂਟ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ 13 ਪ੍ਰੋਟੋਫਿਲਮੈਂਟ ਇੱਕ ਸਿਲੰਡਰ ਬਣਤਰ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਕਈ ਭੂਮਿਕਾਵਾਂ ਨਿਭਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਸ਼ਕਲ, ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਅਤੇ ਇੰਟਰਸੈਲੂਲਰ ਟ੍ਰਾਂਸਪੋਰਟ 3,4 ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਇੰਟਰਫੇਸ ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਇਹਨਾਂ ਅਖੌਤੀ ਕੋਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲਾਂ ਨੂੰ ਸੈਲੂਲੋਜ਼ ਸਿੰਥੇਸ ਕੰਪਲੈਕਸਾਂ 4,5 ਦੇ ਨਿਯਮ ਦੁਆਰਾ ਸੈਲੂਲੋਜ਼ ਮਾਈਕ੍ਰੋਫਾਈਬਰਿਲਾਂ ਦੇ ਸੰਗਠਨ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਰੂਟ ਐਪੀਡਰਮਲ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਕੋਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ, ਜੋ ਜੜ੍ਹ ਦੇ ਸਿਰੇ ਦੇ ਤੇਜ਼ ਲੰਬਾਈ ਦੇ ਜ਼ੋਨ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਹਨ, ਪਾਸੇ ਵੱਲ ਸਥਿਤ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਸੈਲੂਲੋਜ਼ ਮਾਈਕ੍ਰੋਫਾਈਬਰ ਇਹਨਾਂ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲਾਂ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਵਿਸਥਾਰ ਦੀ ਦਿਸ਼ਾ ਨੂੰ ਸੀਮਤ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਐਨੀਸੋਟ੍ਰੋਪਿਕ ਸੈੱਲ ਲੰਬਾਈ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਇਸ ਲਈ, ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਫੰਕਸ਼ਨ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਨਾਲ ਨੇੜਿਓਂ ਸੰਬੰਧਿਤ ਹੈ। ਟਿਊਬੂਲਿਨ ਨੂੰ ਏਨਕੋਡ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਜੀਨਾਂ ਵਿੱਚ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ ਬਦਲ, ਅਰੇਬੀਡੋਪਸਿਸ 6,7 ਵਿੱਚ ਕੋਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਐਰੇ ਦੇ ਵਿਘਨ ਅਤੇ ਖੱਬੇ ਜਾਂ ਸੱਜੇ-ਪਾਸੇ ਵਾਲੇ ਵਾਧੇ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦੇ ਹਨ। ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵਿੱਚ ਪਰਿਵਰਤਨ ਜੋ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਵੀ ਜੜ੍ਹਾਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਵਿਗਾੜ ਸਕਦੇ ਹਨ8,9,10,11,12,13। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ-ਵਿਘਨ ਪਾਉਣ ਵਾਲੀਆਂ ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਦੇ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਡਿਸੋਪਾਈਰਾਮਾਈਡ, ਜਿਸਨੂੰ ਪ੍ਰੀਟੀਲਾਕਲੋਰ ਵੀ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਵੀ ਖੱਬੇ-ਪਾਸੇ ਵਾਲੇ ਤਿਰਛੇ ਜੜ੍ਹਾਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦਾ ਹੈ14। ਇਹ ਅੰਕੜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੀ ਦਿਸ਼ਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਫੰਕਸ਼ਨ ਦਾ ਸਹੀ ਨਿਯਮਨ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ।
ਕਈ ਕਿਸਮਾਂ ਦੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਖੋਜੇ ਗਏ ਹਨ, ਅਤੇ ਇਹਨਾਂ ਦਵਾਈਆਂ ਨੇ ਸਾਇਟੋਸਕੇਲੇਟਲ ਖੋਜ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ਖੇਤੀਬਾੜੀ ਅਤੇ ਦਵਾਈ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾਇਆ ਹੈ। ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਓਰੀਜ਼ਾਲਿਨ, ਡਾਇਨਾਈਟਰੋਐਨੀਲੀਨ ਮਿਸ਼ਰਣ, ਡਿਸੋਪਾਈਰਾਮਾਈਡ, ਬੈਂਜ਼ਾਮਾਈਡ-ਸਬੰਧਤ ਮਿਸ਼ਰਣ, ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਐਨਾਲਾਗ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਫੰਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕ ਸਕਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਰੋਕ ਸਕਦੇ ਹਨ। ਇਸ ਲਈ, ਇਹਨਾਂ ਨੂੰ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਕਿਉਂਕਿ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਪੌਦਿਆਂ ਅਤੇ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹਿੱਸਾ ਹਨ, ਇਸ ਲਈ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਦੋਵੇਂ ਸੈੱਲ ਕਿਸਮਾਂ ਲਈ ਸਾਈਟੋਟੌਕਸਿਕ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਇਸ ਲਈ, ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਾਨਤਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਉਪਯੋਗਤਾ ਦੇ ਬਾਵਜੂਦ, ਵਿਹਾਰਕ ਉਦੇਸ਼ਾਂ ਲਈ ਸੀਮਤ ਗਿਣਤੀ ਵਿੱਚ ਐਂਟੀਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਏਜੰਟ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।
ਸਟ੍ਰੈਪਟੋਮਾਈਸਿਸ ਸਟ੍ਰੈਪਟੋਮਾਈਸਿਸ ਪਰਿਵਾਰ ਦੀ ਇੱਕ ਜੀਨਸ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਐਰੋਬਿਕ, ਗ੍ਰਾਮ-ਸਕਾਰਾਤਮਕ, ਫਿਲਾਮੈਂਟਸ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ ਅਤੇ ਇਹ ਸੈਕੰਡਰੀ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟਸ ਦੀ ਇੱਕ ਵਿਸ਼ਾਲ ਸ਼੍ਰੇਣੀ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਲਈ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ, ਇਸਨੂੰ ਨਵੇਂ ਜੈਵਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕੁਦਰਤੀ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੇ ਸਭ ਤੋਂ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਸਰੋਤਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਮੌਜੂਦਾ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਕੂਮਾਮੋਨਾਮਾਈਡ ਨਾਮਕ ਇੱਕ ਨਵਾਂ ਮਿਸ਼ਰਣ ਖੋਜਿਆ, ਜਿਸਨੂੰ ਸਟ੍ਰੈਪਟੋਮਾਈਸਿਸ ਵੇਰੇਨਸਿਸ MK493-CF1 ਅਤੇ S. ਵੇਰੇਨਸਿਸ ISP 5486 ਤੋਂ ਅਲੱਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸਪੈਕਟ੍ਰਲ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਅਤੇ ਪੂਰੇ ਸਪੈਕਟ੍ਰਲ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਕੂਮਾਮੋਨਾਮਾਈਡ ਦੀ ਬਣਤਰ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਅਤੇ ਇਸਦਾ ਵਿਲੱਖਣ N-alkoxypyrole ਪਿੰਜਰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ। ਉਰਸਮੋਨੋਮਾਈਡ ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਦਾ ਇੱਕ ਸਿੰਥੈਟਿਕ ਇੰਟਰਮੀਡੀਏਟ, ਉਰਸਮੋਨਿਕ ਐਸਿਡ, ਪ੍ਰਸਿੱਧ ਮਾਡਲ ਪੌਦੇ ਅਰਬੀਡੋਪਸਿਸ ਥਾਲੀਆਨਾ ਦੇ ਵਾਧੇ ਅਤੇ ਉਗਣ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਪਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਇੱਕ ਬਣਤਰ-ਗਤੀਵਿਧੀ ਸਬੰਧ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ C9 ਵਾਲਾ ਇੱਕ ਮਿਸ਼ਰਣ, ਜਿਸਨੂੰ ਉਰਸੋਨਿਕ ਐਸਿਡ (KAND) ਦਾ ਨੋਨਾਇਲੌਕਸੀ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਵਿਕਾਸ ਅਤੇ ਉਗਣ 'ਤੇ ਰੋਕਥਾਮ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਨਵੇਂ ਖੋਜੇ ਗਏ ਪੌਦੇ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਵਾਲੇ ਨੇ ਤੰਬਾਕੂ ਅਤੇ ਲਿਵਰਵਰਟ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਵੀ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕੀਤਾ ਅਤੇ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਜਾਂ HeLa ਸੈੱਲਾਂ ਲਈ ਸਾਈਟੋਟੌਕਸਿਕ ਨਹੀਂ ਸੀ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਕੁਝ ਉਰਮੋਟੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਇੱਕ ਵਿਗੜਿਆ ਹੋਇਆ ਰੂਟ ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਪੈਦਾ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਜਿਸਦਾ ਅਰਥ ਹੈ ਕਿ ਇਹ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵ ਸਿੱਧੇ ਜਾਂ ਅਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲਜ਼ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਇਸ ਵਿਚਾਰ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਇਮਯੂਨੋਹਿਸਟੋਕੈਮੀਕਲ ਜਾਂ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨਾਲ ਲੇਬਲ ਕੀਤੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲਜ਼ ਦੇ ਸਾਡੇ ਨਿਰੀਖਣ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ KAND ਇਲਾਜ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲਜ਼ ਨੂੰ ਡੀਪੋਲੀਮਰਾਈਜ਼ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਕੁਮਾਮੋਟੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਐਕਟਿਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਫਿਲਾਮੈਂਟਸ ਨੂੰ ਵਿਘਨ ਪਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਅਸੀਂ ਇੱਕ ਨਵਾਂ ਪੌਦਾ ਵਿਕਾਸ ਰੋਕਣ ਵਾਲਾ ਖੋਜਿਆ ਹੈ ਜਿਸਦੀ ਕਿਰਿਆ ਦੀ ਵਿਲੱਖਣ ਵਿਧੀ ਸਾਈਟੋਸਕੇਲਟਨ ਦਾ ਵਿਨਾਸ਼ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ।
ਟੋਕੀਓ ਦੇ ਸ਼ਿਨਾਗਾਵਾ-ਕੂ ਵਿੱਚ ਮਿੱਟੀ ਤੋਂ ਸਟ੍ਰੇਨ MK493-CF1 ਨੂੰ ਅਲੱਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸਟ੍ਰੇਨ MK493-CF1 ਨੇ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸ਼ਾਖਾਵਾਂ ਵਾਲਾ ਸਟ੍ਰੋਮਲ ਮਾਈਸੀਲੀਅਮ ਬਣਾਇਆ। 16S ਰਾਈਬੋਸੋਮਲ RNA ਜੀਨ (1422 bp) ਦਾ ਅੰਸ਼ਕ ਕ੍ਰਮ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਹ ਸਟ੍ਰੇਨ S. werraensis (NBRC 13404T = ISP 5486, 1421/1422 bp, T: ਆਮ ਸਟ੍ਰੇਨ, 99.93%) ਨਾਲ ਬਹੁਤ ਮਿਲਦਾ ਜੁਲਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਨਤੀਜੇ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ, ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਕਿ ਇਹ ਸਟ੍ਰੇਨ S. werraensis ਦੀ ਕਿਸਮ ਦੇ ਸਟ੍ਰੇਨ ਨਾਲ ਨੇੜਿਓਂ ਸਬੰਧਤ ਸੀ। ਇਸ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਅਸਥਾਈ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇਸ ਸਟ੍ਰੇਨ ਦਾ ਨਾਮ S. werraensis MK493-CF1 ਰੱਖਿਆ। S. werraensis ISP 5486T ਵੀ ਉਹੀ ਬਾਇਓਐਕਟਿਵ ਮਿਸ਼ਰਣ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਕਿਉਂਕਿ ਇਸ ਸੂਖਮ ਜੀਵ ਤੋਂ ਕੁਦਰਤੀ ਉਤਪਾਦ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਖੋਜ ਸੀ, ਇਸ ਲਈ ਹੋਰ ਰਸਾਇਣਕ ਖੋਜ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਜੌਂ ਮਾਧਿਅਮ 'ਤੇ 30°C 'ਤੇ ਠੋਸ-ਅਵਸਥਾ ਫਰਮੈਂਟੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ 14 ਦਿਨਾਂ ਲਈ S. werraensis MK493-CF1 ਦੀ ਕਾਸ਼ਤ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ 50% EtOH ਨਾਲ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ। 59.5 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ ਕੱਚਾ ਐਬਸਟਰੈਕਟ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ 60 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਨਮੂਨਾ ਸੁਕਾਇਆ ਗਿਆ। ਕੱਚੇ ਐਬਸਟਰੈਕਟ ਨੂੰ N-methoxy-1H-pyrrole-2-carboxamide (1, ਨਾਮਕ coumamonamide, 36.0 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ) ਦੇਣ ਲਈ ਰਿਵਰਸ ਫੇਜ਼ HPLC ਦੇ ਅਧੀਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। 1 ਦੀ ਕੁੱਲ ਮਾਤਰਾ ਕੱਚੇ ਐਬਸਟਰੈਕਟ ਦਾ ਲਗਭਗ 60% ਹੈ। ਇਸ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਕੁਮਾਮੋਟੋਆਮਾਈਡ 1 ਦੇ ਗੁਣਾਂ ਦਾ ਵਿਸਥਾਰ ਨਾਲ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਦਾ ਫੈਸਲਾ ਕੀਤਾ।
ਕੂਮਾਮੋਨਾਮਾਈਡ 1 ਇੱਕ ਚਿੱਟਾ ਅਮੋਰਫਸ ਪਾਊਡਰ ਹੈ ਅਤੇ ਉੱਚ ਰੈਜ਼ੋਲੂਸ਼ਨ ਪੁੰਜ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ (HRESIMS) C6H8N2O2 (ਚਿੱਤਰ 1) ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੇ C2-ਬਦਲਵੇਂ ਪਾਈਰੋਲ ਟੁਕੜੇ ਨੂੰ δH 6.94 (1H, t, J = 2.8, 4.8 Hz, H-4), δH 6.78 (1H, d, J = 2.5, δH 1H NMR ਸਪੈਕਟ੍ਰਮ ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ: 4.5 Hz, H-5) ਅਤੇ δH 6.78 (1H, d, J = 2.5 Hz, H-6), ਅਤੇ 13C NMR ਸਪੈਕਟ੍ਰਮ ਚਾਰ sp2 ਕਾਰਬਨ ਪਰਮਾਣੂਆਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। C2 ਸਥਿਤੀ 'ਤੇ ਇੱਕ ਐਮਾਈਡ ਸਮੂਹ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ δC 161.1 'ਤੇ C-3 ਪ੍ਰੋਟੋਨ ਤੋਂ ਐਮਾਈਡ ਕਾਰਬੋਨੀਲ ਕਾਰਬਨ ਤੱਕ HMBC ਸਬੰਧ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, δH 4.10 (3H, S) ਅਤੇ δC 68.3 'ਤੇ 1 H ਅਤੇ 13 C NMR ਸਿਖਰ ਅਣੂ ਵਿੱਚ N-ਮੈਥੋਕਸੀ ਸਮੂਹਾਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਹਾਲਾਂਕਿ ਮੈਥੋਕਸੀ ਸਮੂਹ ਦੀ ਸਹੀ ਸਥਿਤੀ ਅਜੇ ਤੱਕ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਸਕੋਪਿਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਵਧੇ ਹੋਏ ਅੰਤਰ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਸਕੋਪ ੀ ਅਤੇ ਨਿਊਕਲੀਅਰ ਓਵਰਹਾਊਜ਼ਰ ਸੰਖੇਪ (NOEDF) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਨਹੀਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, N-ਮੈਥੋਕਸੀ-1H-ਪਾਇਰੋਲ-2-ਕਾਰਬੋਕਸਾਮਾਈਡ ਪਹਿਲਾ ਉਮੀਦਵਾਰ ਮਿਸ਼ਰਣ ਬਣ ਗਿਆ।
1 ਦੀ ਸਹੀ ਬਣਤਰ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ, ਇੱਕ ਕੁੱਲ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ (ਚਿੱਤਰ 2a)। ਵਪਾਰਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਉਪਲਬਧ 2-ਐਮੀਨੋਪਾਈਰੀਡੀਨ 2 ਦਾ m-CPBA ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕਰਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਉਪਜ ਵਿੱਚ ਅਨੁਸਾਰੀ N-ਆਕਸਾਈਡ 3 ਪ੍ਰਾਪਤ ਹੋਇਆ। 2 ਦੇ 2-ਐਮੀਨੋਪਾਈਰੀਡੀਨੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਅਬਰਾਮੋਵਿਚ ਦੁਆਰਾ ਵਰਣਿਤ ਸਾਈਕਲੋਕੰਡੈਂਸੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ 90°C 'ਤੇ ਬੈਂਜੀਨ ਵਿੱਚ ਕੀਤੀ ਗਈ ਤਾਂ ਜੋ ਲੋੜੀਂਦਾ 1-ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸੀ-1H-ਪਾਇਰੋਲ-2-ਕਾਰਬੋਨੀਟ੍ਰਾਈਲ 5 ਗ੍ਰਾਮ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕੇ। ਗਤੀ 60% (ਦੋ ਪੜਾਅ)। 15,16। 4 ਦੇ ਮਿਥਾਈਲੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਹਾਈਡ੍ਰੋਲਾਈਸਿਸ ਨੇ ਫਿਰ 1-ਮੈਥੋਕਸੀ-1H-ਪਾਇਰੋਲ-2-ਕਾਰਬੋਕਸਿਲਿਕ ਐਸਿਡ (ਜਿਸਨੂੰ "ਕਿਊਮੋਟੋਨਿਕ ਐਸਿਡ" ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, 6) ਚੰਗੀ ਉਪਜ ਵਿੱਚ ਦਿੱਤਾ (70%, ਦੋ ਕਦਮ)। ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਜਲਮਈ ਅਮੋਨੀਆ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਐਸਿਡ ਕਲੋਰਾਈਡ ਇੰਟਰਮੀਡੀਏਟ 6 ਦੁਆਰਾ ਐਮੀਡੇਸ਼ਨ ਨੇ 98% ਉਪਜ ਵਿੱਚ ਕੁਮਾਮੋਟੋ ਐਮਾਈਡ 1 ਦਿੱਤਾ। ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਿਤ 1 ਦੇ ਸਾਰੇ ਸਪੈਕਟ੍ਰਲ ਡੇਟਾ ਆਈਸੋਲੇਟਡ 1 ਦੇ ਸਮਾਨ ਸਨ, ਇਸ ਲਈ 1 ਦੀ ਬਣਤਰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ;
ਅਰਬੇਨਾਮਾਈਡ ਅਤੇ ਅਰਬੇਨਿਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਜੈਵਿਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦਾ ਆਮ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਅਤੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ। (ਏ) ਕੁਮਾਮੋਟੋ ਐਮਾਈਡ ਦਾ ਕੁੱਲ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ। (ਬੀ) ਸੱਤ-ਦਿਨ ਪੁਰਾਣੇ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੇ ਅਰਬੀਡੋਪਸਿਸ ਕੋਲੰਬੀਆ (ਕੋਲ) ਦੇ ਬੂਟੇ ਮੁਰਾਸ਼ੀਗੇ ਅਤੇ ਸਕੂਗ (ਐਮਐਸ) ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਉਗਾਏ ਗਏ ਸਨ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚ ਕੂਮਾਮੋਨਾਮਾਈਡ 6 ਜਾਂ ਕੂਮਾਮੋਨਾਮਾਈਡ 1 ਦਰਸਾਈ ਗਈ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਸੀ। ਸਕੇਲ ਬਾਰ = 1 ਸੈਂਟੀਮੀਟਰ।
ਪਹਿਲਾਂ, ਅਸੀਂ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਕਰਨ ਦੀ ਯੋਗਤਾ ਲਈ ਅਰਬੇਨਾਮਾਈਡ ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਵਿਚਕਾਰਲੇ ਪਦਾਰਥਾਂ ਦੀਆਂ ਜੈਵਿਕ ਗਤੀਵਿਧੀਆਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ। ਅਸੀਂ ਇਸ ਮਾਧਿਅਮ 'ਤੇ ਐਮਐਸ ਅਗਰ ਮਾਧਿਅਮ ਅਤੇ ਕਲਚਰਡ ਅਰਬੀਡੋਪਸਿਸ ਥਾਲੀਆਨਾ ਦੇ ਬੂਟਿਆਂ ਵਿੱਚ ਉਰਸਮੋਨਾਮਾਈਡ 1 ਜਾਂ ਉਰਸਮੋਨਿਕ ਐਸਿਡ 6 ਦੀਆਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣਾਂ ਨੂੰ ਜੋੜਿਆ। ਇਹਨਾਂ ਪਰਖਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ 6 ਦੀ ਉੱਚ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (500 μM) ਜੜ੍ਹਾਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕਦੀ ਹੈ (ਚਿੱਤਰ 2b)। ਅੱਗੇ, ਅਸੀਂ 6 ਦੀ N1 ਸਥਿਤੀ ਨੂੰ ਬਦਲ ਕੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਅਤੇ ਉਨ੍ਹਾਂ 'ਤੇ ਬਣਤਰ-ਗਤੀਵਿਧੀ ਸਬੰਧ ਅਧਿਐਨ ਕੀਤੇ (ਐਨਾਲਾਗ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਸਹਾਇਕ ਜਾਣਕਾਰੀ (SI) ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ)। ਅਰਬੀਡੋਪਸਿਸ ਦੇ ਬੂਟੇ 50 μM ਉਰਸੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਵਾਲੇ ਮਾਧਿਅਮ 'ਤੇ ਉਗਾਏ ਗਏ ਸਨ, ਅਤੇ ਜੜ੍ਹ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਮਾਪੀ ਗਈ ਸੀ। ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਤਸਵੀਰ 'ਤੇ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਚਿੱਤਰ 3a, b, ਅਤੇ S1 ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਕੂਮਾਮੋ ਐਸਿਡਾਂ ਵਿੱਚ N1 ਸਥਿਤੀ 'ਤੇ ਰੇਖਿਕ ਅਲਕੋਕਸੀ ਚੇਨਾਂ (9, 10, 11, 12, ਅਤੇ 13) ਜਾਂ ਵੱਡੀਆਂ ਅਲਕੋਕਸੀ ਚੇਨਾਂ (15, 16, ਅਤੇ 17) ਦੀਆਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਲੰਬਾਈਆਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ। ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਨੇ ਜੜ੍ਹਾਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਰੁਕਾਵਟ ਦਿਖਾਈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ 200 μM 10, 11, ਜਾਂ 17 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਨੇ ਉਗਣ ਨੂੰ ਰੋਕਿਆ (ਚਿੱਤਰ 3c ਅਤੇ S2)।
ਕੁਮਾਮੋਟੋ ਐਮਾਈਡ ਅਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੇ ਬਣਤਰ-ਗਤੀਵਿਧੀ ਸਬੰਧਾਂ ਦਾ ਅਧਿਐਨ। (a) ਐਨਾਲਾਗਾਂ ਦੀ ਬਣਤਰ ਅਤੇ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਯੋਜਨਾ। (b) 50 μM ਕੂਮਾਮੋਨਾਮਾਈਡ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਦੇ ਨਾਲ ਜਾਂ ਬਿਨਾਂ MS ਮਾਧਿਅਮ 'ਤੇ ਉਗਾਏ ਗਏ 7-ਦਿਨ ਪੁਰਾਣੇ ਬੂਟਿਆਂ ਦੀ ਜੜ੍ਹ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਦਾ ਮਾਪ। ਤਾਰੇ ਸ਼ੈਮ ਟ੍ਰੀਟਮੈਂਟ (t ਟੈਸਟ, p) ਨਾਲ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।< 0.05). n>18. ਡੇਟਾ ਨੂੰ ਔਸਤ ± SD ਵਜੋਂ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। nt ਦਾ ਅਰਥ ਹੈ "ਪਰਖਿਆ ਨਹੀਂ ਗਿਆ" ਕਿਉਂਕਿ 50% ਤੋਂ ਵੱਧ ਬੀਜ ਉਗ ਨਹੀਂ ਸਕੇ। (c) 200 μM ਕੂਮਾਮੋਨਾਮਾਈਡ ਅਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਜਾਂ ਬਿਨਾਂ MS ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ 7 ​​ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਬੀਜਾਂ ਦੀ ਉਗਣ ਦਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ। ਤਾਰੇ ਸ਼ੈਮ ਟ੍ਰੀਟਮੈਂਟ (ਚੀ-ਵਰਗ ਟੈਸਟ) ਨਾਲ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। n=96।
ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, C9 ਤੋਂ ਲੰਬੀਆਂ ਐਲਕਾਈਲ ਸਾਈਡ ਚੇਨਾਂ ਦੇ ਜੋੜ ਨੇ ਰੋਕਥਾਮ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ, ਜਿਸ ਤੋਂ ਪਤਾ ਚੱਲਦਾ ਹੈ ਕਿ ਕੁਮਾਮੋਟੋਇਕ ਐਸਿਡ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਨੂੰ ਆਪਣੀ ਜੈਵਿਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਖਾਸ ਆਕਾਰ ਦੀਆਂ ਸਾਈਡ ਚੇਨਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
ਕਿਉਂਕਿ ਬਣਤਰ-ਗਤੀਵਿਧੀ ਸਬੰਧ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ C9 ਨੂੰ ursonic ਐਸਿਡ ਵਿੱਚ ਸੋਧਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ursonic ਐਸਿਡ (ਇਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ KAND 11 ਵਜੋਂ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ) ਦਾ nonyloxy ਡੈਰੀਵੇਟਿਵ ਸਭ ਤੋਂ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਵਾਲਾ ਸੀ, ਅਸੀਂ KAND 11 ਦਾ ਵਧੇਰੇ ਵਿਸਤ੍ਰਿਤ ਵਰਣਨ ਕੀਤਾ। 50 μM KAND 11 ਨਾਲ ਅਰਬੀਡੋਪਸਿਸ ਦੇ ਇਲਾਜ ਨੇ ਲਗਭਗ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਉਗਣ ਨੂੰ ਰੋਕਿਆ, ਜਦੋਂ ਕਿ KAND 11 ਦੀ ਘੱਟ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (40, 30, 20, ਜਾਂ 10 μM) ਨੇ ਖੁਰਾਕ-ਨਿਰਭਰ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਜੜ੍ਹ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕਿਆ (ਚਿੱਤਰ 4a, b)। ਇਹ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ ਕਿ ਕੀ KAND 11 ਰੂਟ ਮੈਰੀਸਟਮ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਸੀਂ ਪ੍ਰੋਪੀਡੀਅਮ ਆਇਓਡਾਈਡ (PI) ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਹੋਏ ਰੂਟ ਮੈਰੀਸਟਮ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਅਤੇ ਮੈਰੀਸਟਮ ਖੇਤਰ ਦੇ ਆਕਾਰ ਨੂੰ ਮਾਪਿਆ। 25 μM KAND-11 ਵਾਲੇ ਮਾਧਿਅਮ 'ਤੇ ਉਗਾਏ ਗਏ ਬੂਟਿਆਂ ਦੇ ਮੈਰੀਸਟਮ ਦਾ ਆਕਾਰ 151.1 ± 32.5 μm ਸੀ, ਜਦੋਂ ਕਿ DMSO ਵਾਲੇ ਕੰਟਰੋਲ ਮਾਧਿਅਮ 'ਤੇ ਉਗਾਏ ਗਏ ਬੂਟਿਆਂ ਦੇ ਮੈਰੀਸਟਮ ਦਾ ਆਕਾਰ 264.7 ± 30.8 μm ਸੀ (ਚਿੱਤਰ 4c, d), ਜੋ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ KAND-11 ਸੈਲੂਲਰ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਬਹਾਲ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਫੈਲਾਉਣਾ। ਰੂਟ ਮੈਰੀਸਟਮ। ਇਸ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, KAND 11 ਦੇ ਇਲਾਜ ਨੇ ਰੂਟ ਮੈਰੀਸਟਮ (ਚਿੱਤਰ 4e) 17 ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਮਾਰਕਰ CDKB2;1p::CDKB2;1-GUS ਸਿਗਨਲ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਘਟਾ ਦਿੱਤੀ। ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ KAND 11 ਸੈੱਲ ਪ੍ਰਸਾਰ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਘਟਾ ਕੇ ਜੜ੍ਹ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ।
ਵਿਕਾਸ 'ਤੇ ਅਰਬੇਨੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ (ਅਰਬੇਨਾਇਲੌਕਸੀ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼) ਦੇ ਰੋਕਥਾਮ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ। (a) KAND 11 ਦੀ ਦਰਸਾਈ ਗਈ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੇ ਨਾਲ MS ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਉਗਾਏ ਗਏ 7-ਦਿਨ ਪੁਰਾਣੇ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੇ ਕੋਲ ਬੂਟੇ। ਸਕੇਲ ਬਾਰ = 1 ਸੈਂਟੀਮੀਟਰ। (b) ਜੜ੍ਹ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਦੀ ਮਾਤਰਾ। ਅੱਖਰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ (ਟੁਕੀ ਐਚਐਸਡੀ ਟੈਸਟ, ਪੀ< 0.05). n>16. ਡੇਟਾ ਨੂੰ ਔਸਤ ± SD ਵਜੋਂ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। (c) 25 μM KAND ਦੇ ਨਾਲ ਜਾਂ ਬਿਨਾਂ MS ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਉਗਾਈਆਂ ਗਈਆਂ ਪ੍ਰੋਪੀਡੀਅਮ ਆਇਓਡਾਈਡ-ਸਟੇਨਡ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੀਆਂ ਕੋਲ ਜੜ੍ਹਾਂ ਦੀ ਕਨਫੋਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ 11. ਚਿੱਟੇ ਬਰੈਕਟ ਰੂਟ ਮੈਰੀਸਟਮ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਸਕੇਲ ਬਾਰ = 100 µm। (d) ਰੂਟ ਮੈਰੀਸਟਮ ਦੇ ਆਕਾਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (n = 10 ਤੋਂ 11)। ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਅੰਤਰ ਟੀ-ਟੈਸਟ (p) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।< 0.05)। ਬਾਰ ਔਸਤ ਮੈਰੀਸਟਮ ਆਕਾਰ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। (e) CDKB2 ਕੰਸਟ੍ਰਕਸ਼ਨ ਵਾਲੇ ਰੂਟ ਮੈਰੀਸਟਮ ਦੀ ਡਿਫਰੈਂਸ਼ੀਅਲ ਇੰਟਰਫੇਰੈਂਸ ਕੰਟ੍ਰਾਸਟ (DIC) ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ; 1pro: CDKB2; 25 µM KAND ਅਸੇ ਦੇ ਨਾਲ ਜਾਂ ਬਿਨਾਂ MS ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਉਗਾਏ ਗਏ 5-ਦਿਨ ਪੁਰਾਣੇ ਬੂਟਿਆਂ 'ਤੇ 1-GUS ਰੰਗਿਆ ਅਤੇ ਰੰਗਿਆ ਹੋਇਆ।
KAND 11 ਦੀ ਫਾਈਟੋਟੌਕਸਿਟੀ ਦੀ ਜਾਂਚ ਇੱਕ ਹੋਰ ਡਾਇਕੋਟਾਈਲਡੋਨਸ ਪੌਦੇ, ਤੰਬਾਕੂ (ਨਿਕੋਟੀਆਨਾ ਟੈਬੈਕਮ), ਅਤੇ ਇੱਕ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਭੂਮੀ ਪੌਦੇ ਮਾਡਲ ਜੀਵ, ਲਿਵਰਵਰਟ (ਮਾਰਚੈਂਟੀਆ ਪੋਲੀਮੋਰਫਾ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਅਰਬੀਡੋਪਸਿਸ ਦੇ ਮਾਮਲੇ ਵਿੱਚ, 25 μM KAND 11 ਵਾਲੇ ਮਾਧਿਅਮ 'ਤੇ ਉਗਾਏ ਗਏ ਤੰਬਾਕੂ SR-1 ਦੇ ਬੂਟਿਆਂ ਨੇ ਛੋਟੀਆਂ ਜੜ੍ਹਾਂ ਪੈਦਾ ਕੀਤੀਆਂ (ਚਿੱਤਰ 5a)। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, 48 ਵਿੱਚੋਂ 40 ਬੀਜ 200 μM KAND 11 ਵਾਲੀਆਂ ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਉਗਦੇ ਹਨ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਸਾਰੇ 48 ਬੀਜ ਨਕਲੀ-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਮੀਡੀਆ 'ਤੇ ਉਗਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ KAND ਦੀ ਉੱਚ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਸੀ (p< 0.05; ਚੀ ਟੈਸਟ -ਵਰਗ) ਨੇ ਤੰਬਾਕੂ ਦੇ ਉਗਣ ਨੂੰ ਰੋਕਿਆ। (ਚਿੱਤਰ 5b)। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, KAND 11 ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਜੋ ਲਿਵਰਵਰਟ ਵਿੱਚ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕਦੀ ਸੀ, ਅਰਬੀਡੋਪਸਿਸ (ਚਿੱਤਰ 5c) ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੇ ਸਮਾਨ ਸੀ। ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ KAND 11 ਕਈ ਤਰ੍ਹਾਂ ਦੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਫਿਰ ਅਸੀਂ ਹੋਰ ਜੀਵਾਂ ਵਿੱਚ ਰਿੱਛ ਮੋਨੋਆਮਾਈਡ-ਸਬੰਧਤ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੀ ਸੰਭਾਵਿਤ ਸਾਈਟੋਟੌਕਸਿਟੀ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ, ਅਰਥਾਤ ਮਨੁੱਖੀ HeLa ਸੈੱਲ ਅਤੇ Escherichia coli ਸਟ੍ਰੇਨ DH5α, ਉੱਚ ਜਾਨਵਰਾਂ ਅਤੇ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧਾਂ ਵਜੋਂ, ਕ੍ਰਮਵਾਰ। ਸੈੱਲ ਪ੍ਰਸਾਰ ਅਸੈਸ ਦੀ ਇੱਕ ਲੜੀ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਦੇਖਿਆ ਕਿ coumamonamide 1, coumamonamidic ਐਸਿਡ 6, ਅਤੇ KAND 11 ਨੇ 100 μM (ਚਿੱਤਰ 5d,e) ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ HeLa ਜਾਂ E. coli ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ।
ਗੈਰ-ਅਰਬੀਡੋਪਸਿਸ ਜੀਵਾਂ ਵਿੱਚ KAND 11 ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕਣਾ। (a) ਦੋ ਹਫ਼ਤੇ ਪੁਰਾਣੇ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੇ SR-1 ਤੰਬਾਕੂ ਦੇ ਬੂਟੇ 25 μM KAND 11 ਵਾਲੀਆਂ ਲੰਬਕਾਰੀ ਸਥਿਤੀ ਵਾਲੀਆਂ MS ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਉਗਾਏ ਗਏ ਸਨ। (b) ਦੋ ਹਫ਼ਤੇ ਪੁਰਾਣੇ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੇ SR-1 ਤੰਬਾਕੂ ਦੇ ਬੂਟੇ 200 μM KAND 11 ਵਾਲੀਆਂ ਖਿਤਿਜੀ ਸਥਿਤੀ ਵਾਲੀਆਂ MS ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਉਗਾਏ ਗਏ ਸਨ। (c) KAND 11 ਦੀ ਦਰਸਾਈ ਗਈ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੇ ਨਾਲ ਗੈਂਬੋਰਗ B5 ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਉਗਾਏ ਗਏ ਦੋ ਹਫ਼ਤੇ ਪੁਰਾਣੇ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੇ ਟਾਕ-1 ਲਿਵਰਵਰਟ ਕਲੀਆਂ। ਲਾਲ ਤੀਰ ਦੋ-ਹਫ਼ਤਿਆਂ ਦੇ ਇਨਕਿਊਬੇਸ਼ਨ ਪੀਰੀਅਡ ਦੇ ਅੰਦਰ ਵਧਣੇ ਬੰਦ ਕਰ ਦੇਣ ਵਾਲੇ ਬੀਜਾਣੂਆਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। (d) HeLa ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਸੈੱਲ ਪ੍ਰਸਾਰ ਪਰਖ। ਸੈੱਲ ਕਾਊਂਟਿੰਗ ਕਿੱਟ 8 (ਡੋਜਿੰਡੋ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਨਿਸ਼ਚਿਤ ਸਮੇਂ ਦੇ ਅੰਤਰਾਲਾਂ 'ਤੇ ਵਿਵਹਾਰਕ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਮਾਪੀ ਗਈ ਸੀ। ਇੱਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ, HeLa ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਇਲਾਜ 5 μg/ml ਐਕਟਿਨੋਮਾਈਸਿਨ D (ਐਕਟ D) ਨਾਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜੋ RNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਦੀ ਮੌਤ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦਾ ਹੈ। ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਤਿੰਨ-ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। (e) E. ਕੋਲੀ ਸੈੱਲ ਪ੍ਰਸਾਰ ਪਰਖ। ਈ. ਕੋਲਾਈ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ OD600 ਨੂੰ ਮਾਪ ਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ, ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਇਲਾਜ 50 μg/ml ਐਂਪਿਸਿਲਿਨ (Amp) ਨਾਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਜੋ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਸੈੱਲ ਕੰਧ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ। ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਤਿੰਨ ਪ੍ਰਤੀਕਾਂ ਵਿੱਚ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।
ਯੂਰਾਮਾਈਡ-ਸਬੰਧਤ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਕਾਰਨ ਹੋਣ ਵਾਲੀ ਸਾਈਟੋਟੌਕਸਿਟੀ ਦੀ ਕਿਰਿਆ ਦੀ ਵਿਧੀ ਨੂੰ ਸਮਝਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਮੱਧਮ ਰੋਕਥਾਮ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਵਾਲੇ ਯੂਰਬੇਨਿਕ ਐਸਿਡ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਦਾ ਮੁੜ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ। ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਇਹ ਤਸਵੀਰ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਚਿੱਤਰ 2b, 6a ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਉਰਮੋਟੋਨਿਕ ਐਸਿਡ 6 ਦੀ ਉੱਚ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (200 μM) ਵਾਲੀਆਂ ਅਗਰ ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਉਗਾਏ ਗਏ ਬੂਟਿਆਂ ਨੇ ਛੋਟੀਆਂ ਅਤੇ ਖੱਬੇ-ਵਕਰ ਵਾਲੀਆਂ ਜੜ੍ਹਾਂ (θ = – 23.7 ± 6.1) ਪੈਦਾ ਕੀਤੀਆਂ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਕੰਟਰੋਲ ਮਾਧਿਅਮ 'ਤੇ ਉਗਾਏ ਗਏ ਬੂਟਿਆਂ ਵਿੱਚੋਂ, ਬੂਟਿਆਂ ਨੇ ਲਗਭਗ ਸਿੱਧੀਆਂ ਜੜ੍ਹਾਂ (θ = – 3.8 ± 7.1) ਪੈਦਾ ਕੀਤੀਆਂ। ਇਹ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਤਿਰਛੀ ਵਾਧਾ ਕੋਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲਜ਼14,18 ਦੇ ਨਪੁੰਸਕਤਾ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਖੋਜ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ-ਅਸਥਿਰ ਕਰਨ ਵਾਲੀਆਂ ਦਵਾਈਆਂ ਡਿਸਓਪਾਈਰਾਮਾਈਡ ਅਤੇ ਓਰੀਜ਼ਾਲਿਨ ਨੇ ਸਾਡੀਆਂ ਵਿਕਾਸ ਸਥਿਤੀਆਂ (ਚਿੱਤਰ 2b, 6a) ਦੇ ਅਧੀਨ ਸਮਾਨ ਜੜ੍ਹ ਝੁਕਾਅ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕੀਤਾ। ਉਸੇ ਸਮੇਂ, ਅਸੀਂ ਉਰਮੋਟੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਅਤੇ ਉਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਕਈਆਂ ਨੂੰ ਚੁਣਿਆ ਜੋ, ਕੁਝ ਖਾਸ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ, ਤਿਰਛੀ ਜੜ੍ਹ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਮਿਸ਼ਰਣ 8, 9, ਅਤੇ 15 ਨੇ ਕ੍ਰਮਵਾਰ 75 μM, 50 μM, ਅਤੇ 40 μM 'ਤੇ ਜੜ੍ਹਾਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੀ ਦਿਸ਼ਾ ਬਦਲ ਦਿੱਤੀ, ਜੋ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਇਹ ਮਿਸ਼ਰਣ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਅਸਥਿਰ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ (ਚਿੱਤਰ 2b, 6a)। ਅਸੀਂ ਸਭ ਤੋਂ ਸ਼ਕਤੀਸ਼ਾਲੀ ursolic ਐਸਿਡ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵ, KAND 11, ਨੂੰ ਘੱਟ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (15 µM) 'ਤੇ ਵੀ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਅਤੇ ਪਾਇਆ ਕਿ KAND 11 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਜੜ੍ਹਾਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਜੜ੍ਹਾਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੀ ਦਿਸ਼ਾ ਅਸਮਾਨ ਸੀ, ਹਾਲਾਂਕਿ ਉਹ ਖੱਬੇ ਪਾਸੇ ਢਲਾਣ ਵੱਲ ਝੁਕਦੇ ਸਨ (ਚਿੱਤਰ C3)। ਕਿਉਂਕਿ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ-ਅਸਥਿਰ ਕਰਨ ਵਾਲੀਆਂ ਦਵਾਈਆਂ ਦੀ ਉੱਚ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਕਈ ਵਾਰ ਜੜ੍ਹਾਂ ਦੇ ਝੁਕਾਅ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਨ ਦੀ ਬਜਾਏ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕਦੀ ਹੈ, ਅਸੀਂ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਇਸ ਸੰਭਾਵਨਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਕਿ KAND 11 ਜੜ੍ਹਾਂ ਦੇ ਐਪੀਡਰਮਲ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਕੋਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਨੂੰ ਦੇਖ ਕੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ। 25 μM KAND 11 ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ ਬੀਜਾਂ ਦੀਆਂ ਜੜ੍ਹਾਂ ਦੇ ਐਪੀਡਰਮਲ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਐਂਟੀ-β-ਟਿਊਬੂਲਿਨ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਇਮਯੂਨੋਹਿਸਟੋਕੈਮਿਸਟਰੀ ਨੇ ਐਲੋਗੇਸ਼ਨ ਜ਼ੋਨ (ਚਿੱਤਰ 6b) ਵਿੱਚ ਐਪੀਡਰਮਲ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਲਗਭਗ ਸਾਰੇ ਕੋਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਦੇ ਗਾਇਬ ਹੋਣ ਨੂੰ ਦਿਖਾਇਆ। ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਕੁਮਾਮੋਟੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵ ਸਿੱਧੇ ਜਾਂ ਅਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ 'ਤੇ ਕੰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ ਤਾਂ ਜੋ ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਵਿਗਾੜਿਆ ਜਾ ਸਕੇ ਅਤੇ ਇਹ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨਵੇਂ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਹਨ।
ਉਰਸੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਅਰਾਬੀਡੋਪਸਿਸ ਥਾਲੀਆਨਾ ਵਿੱਚ ਕੋਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲਜ਼ ਨੂੰ ਬਦਲਦੇ ਹਨ। (ਏ) ਦਰਸਾਏ ਗਏ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਉਰਮੋਟੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਜੜ੍ਹ ਝੁਕਾਅ ਕੋਣ। ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲਜ਼ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਜਾਣੇ ਜਾਂਦੇ ਦੋ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦਾ ਵੀ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ: ਡਿਸੋਪਾਈਰਾਮਾਈਡ ਅਤੇ ਓਰੀਜ਼ਾਲਿਨ। ਇਨਸੈੱਟ ਜੜ੍ਹ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੇ ਕੋਣ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਲਈ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਮਿਆਰ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਤਾਰੇ ਸ਼ੈਮ ਟ੍ਰੀਟਮੈਂਟ (ਟੀ ਟੈਸਟ, ਪੀ) ਨਾਲ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।< 0.05). n>19. ਸਕੇਲ ਬਾਰ = 1 ਸੈਂਟੀਮੀਟਰ। (ਬੀ) ਐਲੋਗੇਸ਼ਨ ਜ਼ੋਨ ਵਿੱਚ ਐਪੀਡਰਮਲ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਕੋਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ। 25 μM KAND 11 ਦੇ ਨਾਲ ਜਾਂ ਬਿਨਾਂ MS ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਉਗਾਈਆਂ ਗਈਆਂ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੀਆਂ ਅਰਬੀਡੋਪਸਿਸ ਕੋਲ ਜੜ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ β-ਟਿਊਬੂਲਿਨ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਅਤੇ ਅਲੈਕਸਾ ਫਲੋਰ-ਕਨਜੁਗੇਟਿਡ ਸੈਕੰਡਰੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਇਮਯੂਨੋਹਿਸਟੋਕੈਮੀਕਲ ਸਟੇਨਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਵਿਜ਼ੂਅਲਾਈਜ਼ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਸਕੇਲ ਬਾਰ = 10 µm। (ਸੀ) ਰੂਟ ਮੈਰੀਸਟਮ ਵਿੱਚ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਦੀ ਮਾਈਟੋਟਿਕ ਬਣਤਰ। ਇਮਯੂਨੋਹਿਸਟੋਕੈਮੀਕਲ ਸਟੇਨਿੰਗ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਦੀ ਵਿਜ਼ੂਅਲਾਈਜ਼ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਮਾਈਟੋਟਿਕ ਬਣਤਰ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਫੇਜ਼ ਜ਼ੋਨ, ਸਪਿੰਡਲ ਅਤੇ ਫ੍ਰੈਗਮੋਪਲਾਸਟ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ, ਨੂੰ ਕਨਫੋਕਲ ਚਿੱਤਰਾਂ ਤੋਂ ਗਿਣਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਤੀਰ ਮਾਈਟੋਟਿਕ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਬਣਤਰਾਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਤਾਰੇ ਸ਼ੈਮ ਟ੍ਰੀਟਮੈਂਟ (ਟੀ ਟੈਸਟ, ਪੀ) ਨਾਲ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।< 0.05). n>9. ਸਕੇਲ ਬਾਰ = 50 µm।
ਹਾਲਾਂਕਿ ਉਰਸਾ ਵਿੱਚ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਫੰਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਵਿਗਾੜਨ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਹੈ, ਪਰ ਇਸਦੀ ਕਾਰਵਾਈ ਦੀ ਵਿਧੀ ਆਮ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਡੀਪੋਲੀਮਰਾਈਜ਼ਿੰਗ ਏਜੰਟਾਂ ਤੋਂ ਵੱਖਰੀ ਹੋਣ ਦੀ ਉਮੀਦ ਹੈ। ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਡੀਪੋਲੀਮਰਾਈਜ਼ਿੰਗ ਏਜੰਟਾਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਡਿਸੋਪਾਈਰਾਮਾਈਡ ਅਤੇ ਓਰੀਜ਼ਾਲਿਨ ਦੀ ਉੱਚ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਐਪੀਡਰਮਲ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਐਨੀਸੋਟ੍ਰੋਪਿਕ ਵਿਸਥਾਰ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਜਦੋਂ ਕਿ KAND 11 ਅਜਿਹਾ ਨਹੀਂ ਕਰਦਾ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, KAND 11 ਅਤੇ ਡਿਸੋਪਾਈਰਾਮਾਈਡ ਦੇ ਸਹਿ-ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਇੱਕ ਸੰਯੁਕਤ ਡਿਸੋਪਾਈਰਾਮਾਈਡ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਜੜ੍ਹ ਵਿਕਾਸ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਅਤੇ KAND 11-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਵਿਕਾਸ ਰੋਕ ਦੇਖੀ ਗਈ (ਚਿੱਤਰ S4)। ਅਸੀਂ KAND 11 ਪ੍ਰਤੀ ਅਤਿ-ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਡਿਸੋਪਾਈਰਾਮਾਈਡ 1-1 (phs1-1) ਮਿਊਟੈਂਟ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਦਾ ਵੀ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ। phs1-1 ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਗੈਰ-ਕੈਨੋਨੀਕਲ ਟਿਊਬਿਊਲਿਨ ਕਾਇਨੇਸ ਪੁਆਇੰਟ ਮਿਊਟੇਸ਼ਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਡਿਸੋਪਾਈਰਾਮਾਈਡ9,20 ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਜਾਣ 'ਤੇ ਛੋਟੀਆਂ ਜੜ੍ਹਾਂ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ। KAND 11 ਵਾਲੇ ਅਗਰ ਮਾਧਿਅਮ 'ਤੇ ਉਗਾਏ ਗਏ phs1-1 ਮਿਊਟੈਂਟ ਬੂਟਿਆਂ ਦੀਆਂ ਡਿਸੋਪਾਈਰਾਮਿਡ (ਚਿੱਤਰ S5) 'ਤੇ ਉਗਾਏ ਗਏ ਬੂਟਿਆਂ ਦੀਆਂ ਜੜ੍ਹਾਂ ਛੋਟੀਆਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਸਨ।
ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਅਸੀਂ KAND 11 ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ ਬੂਟਿਆਂ ਦੇ ਰੂਟ ਮੈਰੀਸਟਮ ਵਿੱਚ ਮਾਈਟੋਟਿਕ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਬਣਤਰਾਂ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪ੍ਰੋਫੇਸ ਜ਼ੋਨ, ਸਪਿੰਡਲ ਅਤੇ ਫ੍ਰੈਗਮੋਪਲਾਸਟ, ਨੂੰ ਦੇਖਿਆ। CDKB2;1p::CDKB2;1-GUS ਲਈ ਨਿਰੀਖਣਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਮਾਈਟੋਟਿਕ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਕਮੀ ਦੇਖੀ ਗਈ (ਚਿੱਤਰ .6c)।
ਸਬਸੈਲੂਲਰ ਰੈਜ਼ੋਲਿਊਸ਼ਨ 'ਤੇ KAND 11 ਦੀ ਸਾਈਟੋਟੌਕਸਿਟੀ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ KAND 11 ਨਾਲ ਤੰਬਾਕੂ BY-2 ਸਸਪੈਂਸ਼ਨ ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਅਤੇ ਉਨ੍ਹਾਂ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਦੇਖਿਆ। ਅਸੀਂ ਪਹਿਲਾਂ KAND 11 ਨੂੰ TagRFP-TUA6 ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ BY-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ, ਜੋ ਕਿ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟਲੀ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲਜ਼ ਨੂੰ ਲੇਬਲ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਤਾਂ ਜੋ KAND 11 ਦੇ ਕੋਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲਜ਼ 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕੇ। ਕੋਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਘਣਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਚਿੱਤਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਸ ਨੇ ਸਾਇਟੋਪਲਾਜ਼ਮਿਕ ਪਿਕਸਲਜ਼ ਵਿੱਚ ਸਾਈਟੋਸਕੇਲੇਟਲ ਪਿਕਸਲਜ਼ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤਤਾ ਨੂੰ ਮਾਪਿਆ। ਪਰਖ ਦੇ ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ 50 μM ਜਾਂ 100 μM KAND 11 ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਘਣਤਾ ਕ੍ਰਮਵਾਰ 0.94 ± 0.74% ਜਾਂ 0.23 ± 0.28% ਤੱਕ ਘੱਟ ਗਈ, ਜਦੋਂ ਕਿ DMSO ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਘਣਤਾ, 1.61 ± 0.34% (ਚਿੱਤਰ 7a) ਸੀ। ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਅਰਬੀਡੋਪਸਿਸ ਵਿੱਚ ਇਸ ਨਿਰੀਖਣ ਦੇ ਅਨੁਕੂਲ ਹਨ ਕਿ KAND 11 ਇਲਾਜ ਕੋਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲਜ਼ ਦੇ ਡੀਪੋਲੀਮਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ (ਚਿੱਤਰ 6b)। ਅਸੀਂ KAND 11 ਦੀ ਸਮਾਨ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ GFP-ABD-ਲੇਬਲ ਵਾਲੇ ਐਕਟਿਨ ਫਿਲਾਮੈਂਟਸ ਨਾਲ BY-2 ਲਾਈਨ ਦੀ ਵੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਅਤੇ ਦੇਖਿਆ ਕਿ KAND 11 ਇਲਾਜ ਨੇ ਐਕਟਿਨ ਫਿਲਾਮੈਂਟਸ ਨੂੰ ਵਿਗਾੜ ਦਿੱਤਾ। 1 ਘੰਟੇ ਲਈ 50 μM ਜਾਂ 100 μM KAND 11 ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਨੇ ਐਕਟਿਨ ਫਿਲਾਮੈਂਟ ਘਣਤਾ ਨੂੰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ 1.20 ± 0.62% ਜਾਂ 0.61 ± 0.26% ਤੱਕ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ, ਜਦੋਂ ਕਿ DMSO-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਘਣਤਾ 1.69 ± 0.51% ਸੀ (ਚਿੱਤਰ 2)। 7b)। ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਪ੍ਰੋਪੀਜ਼ਾਮਾਈਡ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦੇ ਉਲਟ ਹਨ, ਜੋ ਐਕਟਿਨ ਫਿਲਾਮੈਂਟਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਨਹੀਂ ਕਰਦਾ, ਅਤੇ ਲੈਟਰਨਕੂਲਿਨ B, ਇੱਕ ਐਕਟਿਨ ਡੀਪੋਲੀਮਰਾਈਜ਼ਰ ਜੋ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲਜ਼ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਨਹੀਂ ਕਰਦਾ (SI ਚਿੱਤਰ S6)। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਕੂਮਾਮੋਨਾਮਾਈਡ 1, ਕੂਮਾਮੋਨਾਮਾਈਡ ਐਸਿਡ 6, ਜਾਂ KAND 11 ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਨੇ HeLa ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ (SI ਚਿੱਤਰ S7)। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, KAND 11 ਦੀ ਕਿਰਿਆ ਦੀ ਵਿਧੀ ਜਾਣੇ-ਪਛਾਣੇ ਸਾਇਟੋਸਕੇਲੇਟਨ ਡਿਸਪੈਕਟਰਾਂ ਨਾਲੋਂ ਵੱਖਰੀ ਮੰਨੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, KAND 11 ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ BY-2 ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਸਾਡੇ ਸੂਖਮ ਨਿਰੀਖਣ ਨੇ KAND 11 ਇਲਾਜ ਦੌਰਾਨ ਸੈੱਲ ਮੌਤ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਦਾ ਖੁਲਾਸਾ ਕੀਤਾ ਅਤੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ KAND 11 ਇਲਾਜ ਦੇ 30 ਮਿੰਟ ਬਾਅਦ ਇਵਾਨਸ ਨੀਲੇ-ਧੱਬੇ ਵਾਲੇ ਮਰੇ ਹੋਏ ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਅਨੁਪਾਤ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਨਹੀਂ ਵਧਿਆ, ਜਦੋਂ ਕਿ 50 μM ਜਾਂ 100 μM KAND ਨਾਲ 90 ਮਿੰਟ ਦੇ ਇਲਾਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਮਰੇ ਹੋਏ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਕ੍ਰਮਵਾਰ 43.7% ਜਾਂ 80.1% ਤੱਕ ਵਧ ਗਈ (ਚਿੱਤਰ 7c)। ਇਕੱਠੇ ਲਏ ਜਾਣ 'ਤੇ, ਇਹ ਡੇਟਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਨਾਵਲ ursolic ਐਸਿਡ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵ KAND 11 ਇੱਕ ਪੌਦਾ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਸਾਇਟੋਸਕੇਲੇਟਲ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਹੈ ਜਿਸਦੀ ਕਿਰਿਆ ਦੀ ਪਹਿਲਾਂ ਅਣਜਾਣ ਵਿਧੀ ਹੈ।
KAND, ਕਾਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ, ਐਕਟਿਨ ਫਿਲਾਮੈਂਟਸ, ਅਤੇ ਤੰਬਾਕੂ BY-2 ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ। (a) TagRFP-TUA6 ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ BY-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਕਾਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਦਾ ਵਿਜ਼ੂਅਲਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ। KAND 11 (50 μM ਜਾਂ 100 μM) ਜਾਂ DMSO ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ BY-2 ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਨਫੋਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਕੋਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਘਣਤਾ ਦੀ ਗਣਨਾ 25 ਸੁਤੰਤਰ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਗ੍ਰਾਫਾਂ ਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਅੱਖਰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ (ਟੁਕੀ HSD ਟੈਸਟ, p< 0.05). ਸਕੇਲ ਬਾਰ = 10 µm। (b) GFP-ABD2 ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ ਵਿਜ਼ੂਅਲਾਈਜ਼ ਕੀਤੇ ਗਏ BY-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਕੋਰਟੀਕਲ ਐਕਟਿਨ ਫਿਲਾਮੈਂਟਸ। KAND 11 (50 μM ਜਾਂ 100 μM) ਜਾਂ DMSO ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ BY-2 ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਨਫੋਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਕੋਰਟੀਕਲ ਐਕਟਿਨ ਫਿਲਾਮੈਂਟਸ ਦੀ ਘਣਤਾ ਦੀ ਗਣਨਾ 25 ਸੁਤੰਤਰ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਗ੍ਰਾਫਾਂ ਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਅੱਖਰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ (ਟੂਕੀ HSD ਟੈਸਟ, p< 0.05). ਸਕੇਲ ਬਾਰ = 10 µm। (c) ਈਵਾਨਸ ਬਲੂ ਸਟੈਨਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਮਰੇ ਹੋਏ BY-2 ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਨਿਰੀਖਣ। KAND 11 (50 μM ਜਾਂ 100 μM) ਜਾਂ DMSO ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ BY-2 ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਚਮਕਦਾਰ-ਖੇਤਰ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਦੁਆਰਾ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ। n=3. ਸਕੇਲ ਬਾਰ = 100 µm।
ਨਵੇਂ ਕੁਦਰਤੀ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੀ ਖੋਜ ਅਤੇ ਵਰਤੋਂ ਨੇ ਮਨੁੱਖੀ ਜੀਵਨ ਦੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪਹਿਲੂਆਂ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤਰੱਕੀ ਕੀਤੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਦਵਾਈ ਅਤੇ ਖੇਤੀਬਾੜੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ। ਕੁਦਰਤੀ ਸਰੋਤਾਂ ਤੋਂ ਲਾਭਦਾਇਕ ਮਿਸ਼ਰਣ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਇਤਿਹਾਸਕ ਖੋਜ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ। ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਐਕਟਿਨੋਮਾਈਸੀਟਸ ਨੂੰ ਨੇਮਾਟੋਡਾਂ ਲਈ ਐਂਟੀਪੈਰਾਸੀਟਿਕ ਐਂਟੀਬਾਇਓਟਿਕਸ ਵਜੋਂ ਲਾਭਦਾਇਕ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੈਕੰਡਰੀ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟਸ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਐਵਰਮੇਕਟਿਨ, ਆਈਵਰਮੇਕਟਿਨ ਅਤੇ ਬਲੋਮਾਈਸਿਨ ਦਾ ਲੀਡ ਮਿਸ਼ਰਣ ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਇੱਕ ਕੈਂਸਰ ਵਿਰੋਧੀ ਏਜੰਟ ਵਜੋਂ ਦਵਾਈ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ21,22। ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਐਕਟਿਨੋਮਾਈਸੀਟਸ ਤੋਂ ਕਈ ਤਰ੍ਹਾਂ ਦੇ ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਦੇ ਮਿਸ਼ਰਣ ਖੋਜੇ ਗਏ ਹਨ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਕੁਝ ਪਹਿਲਾਂ ਹੀ ਵਪਾਰਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ1,23। ਇਸ ਲਈ, ਲੋੜੀਂਦੀਆਂ ਜੈਵਿਕ ਗਤੀਵਿਧੀਆਂ ਵਾਲੇ ਕੁਦਰਤੀ ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੂੰ ਅਲੱਗ ਕਰਨ ਲਈ ਐਕਟਿਨੋਮਾਈਸੀਟ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟਸ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੂੰ ਇੱਕ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਰਣਨੀਤੀ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਐਸ. ਵੇਰੇਨਸਿਸ ਤੋਂ ਇੱਕ ਨਵਾਂ ਮਿਸ਼ਰਣ, ਕੂਮਾਮੋਨਾਮਾਈਡ, ਲੱਭਿਆ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ ਸਫਲਤਾਪੂਰਵਕ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ। ਉਰਸੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਯੂਰਬੇਨਾਮਾਈਡ ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਦਾ ਇੱਕ ਸਿੰਥੈਟਿਕ ਇੰਟਰਮੀਡੀਏਟ ਹੈ। ਇਹ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਜੜ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਕਰਲਿੰਗ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਮੱਧਮ ਤੋਂ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਦੀ ਨਾਸ਼ਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਸਿੱਧੇ ਜਾਂ ਅਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪੌਦੇ ਦੇ ਸੂਖਮ ਟਿਊਬਿਊਲਾਂ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨ ਪਹੁੰਚਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਉਰਮੋਟੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਕਿਰਿਆ ਦੀ ਵਿਧੀ ਮੌਜੂਦਾ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ ਨਾਲੋਂ ਵੱਖਰੀ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ KAND 11 ਐਕਟਿਨ ਫਿਲਾਮੈਂਟਸ ਨੂੰ ਵੀ ਵਿਗਾੜਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਮੌਤ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦਾ ਹੈ, ਇੱਕ ਰੈਗੂਲੇਟਰੀ ਵਿਧੀ ਦਾ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਜਿਸ ਦੁਆਰਾ ਉਰਮੋਟੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵ ਸਾਈਟੋਸਕੇਲੇਟਲ ਬਣਤਰਾਂ ਦੀ ਇੱਕ ਵਿਸ਼ਾਲ ਸ਼੍ਰੇਣੀ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰਦੇ ਹਨ।
ਯੂਰਬੇਨੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਹੋਰ ਵਿਸਤ੍ਰਿਤ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਯੂਰਬੇਨੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਕਿਰਿਆ ਦੀ ਵਿਧੀ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਢੰਗ ਨਾਲ ਸਮਝਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰੇਗੀ। ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਅਗਲਾ ਟੀਚਾ ਯੂਰਸੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਘਟੇ ਹੋਏ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲਾਂ ਨਾਲ ਜੁੜਨ ਦੀ ਯੋਗਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕੇ ਕਿ ਕੀ ਯੂਰਸੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵ ਸਿੱਧੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲਾਂ 'ਤੇ ਕੰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਡੀਪੋਲੀਮਰਾਈਜ਼ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਜਾਂ ਕੀ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਕਿਰਿਆ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਅਸਥਿਰਤਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਉਸ ਸਥਿਤੀ ਵਿੱਚ ਜਿੱਥੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਸਿੱਧਾ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਨਹੀਂ ਹਨ, ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਸੈੱਲਾਂ 'ਤੇ ਯੂਰਸੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਦੇ ਕਿਰਿਆ ਸਥਾਨ ਅਤੇ ਅਣੂ ਟੀਚਿਆਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੇ ਗੁਣਾਂ ਅਤੇ ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਉਣ ਦੇ ਸੰਭਾਵੀ ਤਰੀਕਿਆਂ ਨੂੰ ਹੋਰ ਸਮਝਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਮਿਲੇਗੀ। ਸਾਡੇ ਬਾਇਓਐਕਟੀਵਿਟੀ ਪਰਖ ਨੇ ਅਰਬੀਡੋਪਸਿਸ ਥਾਲੀਆਨਾ, ਤੰਬਾਕੂ ਅਤੇ ਲਿਵਰਵਰਟ ਵਰਗੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ 'ਤੇ ਯੂਰਸੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਵਿਲੱਖਣ ਸਾਈਟੋਟੌਕਸਿਕ ਯੋਗਤਾ ਦਾ ਖੁਲਾਸਾ ਕੀਤਾ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਨਾ ਤਾਂ ਈ. ਕੋਲੀ ਅਤੇ ਨਾ ਹੀ ਹੇਲਾ ਸੈੱਲ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਹੋਏ ਸਨ। ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਸੈੱਲਾਂ ਲਈ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਜਾਂ ਕੋਈ ਜ਼ਹਿਰੀਲਾਪਣ ਯੂਰਸੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਦਾ ਇੱਕ ਫਾਇਦਾ ਹੈ ਜੇਕਰ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਖੁੱਲ੍ਹੇ ਖੇਤੀਬਾੜੀ ਖੇਤਰਾਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਦਰਅਸਲ, ਕਿਉਂਕਿ ਯੂਕੇਰੀਓਟਸ ਵਿੱਚ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਆਮ ਬਣਤਰ ਹਨ, ਇਸ ਲਈ ਪੌਦਿਆਂ ਵਿੱਚ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਚੋਣਵੀਂ ਰੋਕਥਾਮ ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਦੇ ਨਾਸ਼ ਲਈ ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਲੋੜ ਹੈ। ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਪ੍ਰੋਪੀਜ਼ਾਮਾਈਡ, ਇੱਕ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਡੀਪੋਲੀਮਰਾਈਜ਼ਿੰਗ ਏਜੰਟ ਜੋ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਟਿਊਬੂਲਿਨ ਨਾਲ ਜੁੜਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਪੋਲੀਮਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ, ਨੂੰ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਸੈੱਲਾਂ ਲਈ ਇਸਦੀ ਘੱਟ ਜ਼ਹਿਰੀਲੇਪਣ ਦੇ ਕਾਰਨ ਇੱਕ ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਦੇ ਨਾਸ਼ਕ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ24। ਡਿਸੋਪਾਈਰਾਮਾਈਡ ਦੇ ਉਲਟ, ਸੰਬੰਧਿਤ ਬੈਂਜ਼ਾਮਾਈਡਾਂ ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ। ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, RH-4032 ਜਾਂ ਬੈਂਜੋਆਕਸਾਮਾਈਡ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਸੈੱਲਾਂ ਜਾਂ ਓਮਾਈਸੀਟਸ ਦੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਨੂੰ ਵੀ ਰੋਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਜ਼ੈਲੀਲਾਮਾਈਡ ਨੂੰ ਇਸਦੀ ਘੱਟ ਫਾਈਟੋਟੌਕਸਿਟੀ25,26,27 ਦੇ ਕਾਰਨ ਇੱਕ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਨਵੇਂ ਖੋਜੇ ਗਏ ਰਿੱਛ ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਚੋਣਵੇਂ ਸਾਈਟੋਟੌਕਸਿਟੀ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਪਰ ਇਹ ਧਿਆਨ ਦੇਣ ਯੋਗ ਹੈ ਕਿ ਹੋਰ ਸੋਧਾਂ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਨੂੰ ਬਦਲ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ, ਸੰਭਾਵੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜਰਾਸੀਮ ਫੰਜਾਈ ਜਾਂ ਓਮਾਈਸੀਟਸ ਦੇ ਨਿਯੰਤਰਣ ਲਈ ਵਾਧੂ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ।
ਅਰਬੇਨੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਦੇ ਵਿਲੱਖਣ ਗੁਣ ਜੜੀ-ਬੂਟੀਆਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਅਤੇ ਖੋਜ ਸਾਧਨਾਂ ਵਜੋਂ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਲਾਭਦਾਇਕ ਹਨ। ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਸਾਈਟੋਸਕੇਲਟਨ ਦੀ ਮਹੱਤਤਾ ਨੂੰ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਾਨਤਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਹੈ। ਪਹਿਲਾਂ ਦੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਪੌਦਿਆਂ ਨੇ ਮੋਰਫੋਜਨੇਸਿਸ ਨੂੰ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਕੇ ਕੋਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਸੰਗਠਨ ਦੇ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਵਿਧੀਆਂ ਨੂੰ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਹੈ। ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੇ ਨਿਯਮ ਲਈ ਜ਼ਿੰਮੇਵਾਰ ਅਣੂਆਂ ਦੀ ਇੱਕ ਵੱਡੀ ਗਿਣਤੀ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ, ਅਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਖੋਜ ਅਜੇ ਵੀ ਜਾਰੀ ਹੈ3,4,28। ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਦੀ ਸਾਡੀ ਮੌਜੂਦਾ ਸਮਝ ਕੋਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਸੰਗਠਨ ਦੇ ਵਿਧੀਆਂ ਦੀ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਵਿਆਖਿਆ ਨਹੀਂ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਹਾਲਾਂਕਿ ਡਿਸੋਪਾਈਰਾਮਾਈਡ ਅਤੇ ਓਰੀਜ਼ਾਲਿਨ ਦੋਵੇਂ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਨੂੰ ਡੀਪੋਲੀਮਰਾਈਜ਼ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਡਿਸੋਪਾਈਰਾਮਾਈਡ ਗੰਭੀਰ ਜੜ੍ਹ ਵਿਗਾੜ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦਾ ਹੈ ਜਦੋਂ ਕਿ ਓਰੀਜ਼ਾਲਿਨ ਦਾ ਇੱਕ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਹਲਕਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਟਿਊਬੂਲਿਨ ਵਿੱਚ ਪਰਿਵਰਤਨ, ਜੋ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਨੂੰ ਸਥਿਰ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜੜ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚ ਡੈਕਸਟ੍ਰੋਰੋਟੇਸ਼ਨ ਦਾ ਕਾਰਨ ਵੀ ਬਣਦਾ ਹੈ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਪੈਕਲੀਟੈਕਸਲ, ਜੋ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਵੀ ਸਥਿਰ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਜਿਹਾ ਨਹੀਂ ਕਰਦਾ। ਇਸ ਲਈ, ਯੂਰਸੋਲਿਕ ਐਸਿਡ ਦੇ ਅਣੂ ਟੀਚਿਆਂ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਅਤੇ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਨਾਲ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਕੋਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਦੇ ਨਿਯਮਨ ਵਿੱਚ ਨਵੀਂ ਸਮਝ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ। ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਵਿਗੜੇ ਹੋਏ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਰਸਾਇਣਾਂ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਡਿਸੋਪਾਈਰਾਮਾਈਡ, ਅਤੇ ਘੱਟ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਰਸਾਇਣਾਂ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਓਰੀਜ਼ਾਲਿਨ ਜਾਂ ਕੁਮਾਮੋਟੋਰਿਕ ਐਸਿਡ, ਦੀ ਭਵਿੱਖੀ ਤੁਲਨਾ, ਵਿਗੜੇ ਹੋਏ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਕਿਵੇਂ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਇਸ ਬਾਰੇ ਸੁਰਾਗ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰੇਗੀ।
ਦੂਜੇ ਪਾਸੇ, ਬਚਾਅ-ਸੰਬੰਧੀ ਸਾਇਟੋਸਕੇਲੇਟਲ ਪੁਨਰਗਠਨ ਯੂਰਸੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਸਾਈਟੋਟੌਕਸਿਟੀ ਨੂੰ ਸਮਝਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ ਹੋਰ ਸੰਭਾਵਨਾ ਹੈ। ਇੱਕ ਰੋਗਾਣੂ ਦਾ ਸੰਕਰਮਣ ਜਾਂ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਏਲੀਸੀਟਰ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਕਈ ਵਾਰ ਸਾਈਟੋਸਕੇਲੇਟਨ ਦੇ ਵਿਨਾਸ਼ ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਮੌਤ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦੀ ਹੈ29। ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਓਮਾਈਸੀਟ-ਪ੍ਰਾਪਤ ਕ੍ਰਿਪਟੋਕਸਾਂਥਿਨ ਨੂੰ ਤੰਬਾਕੂ ਸੈੱਲ ਦੀ ਮੌਤ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਅਤੇ ਐਕਟਿਨ ਫਿਲਾਮੈਂਟਸ ਨੂੰ ਵਿਗਾੜਨ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ KAND ਇਲਾਜ ਨਾਲ ਵਾਪਰਦਾ ਹੈ30,31 ਦੇ ਸਮਾਨ ਹੈ। ਯੂਰਸੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਰੱਖਿਆ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਅਤੇ ਸੈਲੂਲਰ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਸਮਾਨਤਾਵਾਂ ਨੇ ਸਾਨੂੰ ਇਹ ਅਨੁਮਾਨ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕੀਤਾ ਕਿ ਉਹ ਆਮ ਸੈਲੂਲਰ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਚਾਲੂ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਹਾਲਾਂਕਿ ਕ੍ਰਿਪਟੋਕਸਾਂਥਿਨ ਨਾਲੋਂ ਯੂਰਸੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਦਾ ਇੱਕ ਤੇਜ਼ ਅਤੇ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​ਪ੍ਰਭਾਵ ਸਪੱਸ਼ਟ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਐਕਟਿਨ ਫਿਲਾਮੈਂਟਸ ਦਾ ਵਿਘਨ ਸਵੈਚਾਲਤ ਸੈੱਲ ਮੌਤ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਹਮੇਸ਼ਾ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਵਿਘਨ29 ਦੇ ਨਾਲ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦਾ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਇਹ ਦੇਖਣਾ ਬਾਕੀ ਹੈ ਕਿ ਕੀ ਰੋਗਾਣੂ ਜਾਂ ਏਲੀਸੀਟਰ ਵਿਗੜੀ ਹੋਈ ਜੜ੍ਹ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦੇ ਹਨ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਯੂਰਸੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਰੱਖਿਆ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਅਤੇ ਸਾਇਟੋਸਕੇਲੇਟਨ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਵਾਲਾ ਅਣੂ ਗਿਆਨ ਇੱਕ ਆਕਰਸ਼ਕ ਸਮੱਸਿਆ ਹੈ ਜਿਸ ਨੂੰ ਹੱਲ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ। ਯੂਰਸੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਘੱਟ ਅਣੂ ਭਾਰ ਵਾਲੇ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦਾ ਸ਼ੋਸ਼ਣ ਕਰਕੇ, ਅਤੇ ਨਾਲ ਹੀ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸ਼ਕਤੀਆਂ ਵਾਲੇ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਦੀ ਇੱਕ ਸ਼੍ਰੇਣੀ ਦਾ ਫਾਇਦਾ ਉਠਾ ਕੇ, ਉਹ ਅਣਜਾਣ ਸੈਲੂਲਰ ਵਿਧੀਆਂ ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਣ ਦੇ ਮੌਕੇ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ਇਕੱਠੇ ਮਿਲ ਕੇ, ਨਵੇਂ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੀ ਖੋਜ ਅਤੇ ਵਰਤੋਂ ਜੋ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਸੰਚਾਲਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਪੌਦੇ ਦੇ ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ ਨਿਰਧਾਰਨ ਦੇ ਅੰਤਰੀਵ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਅਣੂ ਵਿਧੀਆਂ ਨੂੰ ਹੱਲ ਕਰਨ ਲਈ ਸ਼ਕਤੀਸ਼ਾਲੀ ਤਰੀਕੇ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨਗੇ। ਇਸ ਸੰਦਰਭ ਵਿੱਚ, ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ ਵਿਕਸਤ ਮਿਸ਼ਰਣ ਉਰਮੋਟੋਨਿਕ ਐਸਿਡ, ਜੋ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਅਤੇ ਐਕਟਿਨ ਫਿਲਾਮੈਂਟਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਮੌਤ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਨਿਯੰਤਰਣ ਅਤੇ ਇਹਨਾਂ ਹੋਰ ਵਿਧੀਆਂ ਵਿਚਕਾਰ ਸਬੰਧ ਨੂੰ ਸਮਝਣ ਦਾ ਮੌਕਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਉਰਬੇਨੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਰਸਾਇਣਕ ਅਤੇ ਜੈਵਿਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਸਾਨੂੰ ਪੌਦੇ ਦੇ ਸਾਇਟੋਸਕੇਲਟਨ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਅਣੂ ਰੈਗੂਲੇਟਰੀ ਵਿਧੀਆਂ ਨੂੰ ਸਮਝਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰੇਗਾ।
S. werraensis MK493-CF1 ਨੂੰ 500 mL ਦੇ ਹੈਰਾਨ ਕਰਨ ਵਾਲੇ Erlenmeyer ਫਲਾਸਕ ਵਿੱਚ ਟੀਕਾ ਲਗਾਓ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 110 mL ਬੀਜ ਮਾਧਿਅਮ ਹੋਵੇ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 2% (w/v) ਗਲੈਕਟੋਜ਼, 2% (w/v) ਐਸੈਂਸ ਪੇਸਟ, 1% (w/v) ਬੈਕਟੋ ਰਚਨਾ ਹੋਵੇ। -ਸੋਇਟਨ (ਥਰਮੋ ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ, ਇੰਕ.), 0.5% (w/v) ਮੱਕੀ ਦਾ ਐਬਸਟਰੈਕਟ (KOGOSTCH ਕੰਪਨੀ, ਲਿਮਟਿਡ, ਜਾਪਾਨ), 0.2% (w/v) (NH4)2SO4 ਅਤੇ 0.2% CaCO3 ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ। (pH 7.4 ਨਸਬੰਦੀ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ)। ਬੀਜ ਕਲਚਰ ਨੂੰ ਇੱਕ ਰੋਟਰੀ ਸ਼ੇਕਰ (180 rpm) 'ਤੇ 27°C 'ਤੇ 2 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਠੋਸ ਅਵਸਥਾ ਦੇ ਫਰਮੈਂਟੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਉਤਪਾਦਨ ਕਾਸ਼ਤ। ਬੀਜ ਕਲਚਰ (7 ਮਿ.ਲੀ.) ਨੂੰ 500 ਮਿ.ਲੀ. K-1 ਫਲਾਸਕ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 40 ਗ੍ਰਾਮ ਉਤਪਾਦਨ ਮਾਧਿਅਮ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 15 ਗ੍ਰਾਮ ਪ੍ਰੈੱਸਡ ਜੌਂ (MUSO Co., Ltd., ਜਾਪਾਨ) ਅਤੇ 25 ਗ੍ਰਾਮ ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ (pH ਨੂੰ ਨਸਬੰਦੀ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਐਡਜਸਟ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ) ਸ਼ਾਮਲ ਸੀ। ਫਰਮੈਂਟੇਸ਼ਨ 30°C 'ਤੇ 14 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਫਰਮੈਂਟੇਸ਼ਨ ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ 40 ਮਿ.ਲੀ./ਬੋਤਲ EtOH ਨਾਲ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ (1500 ਗ੍ਰਾਮ, 4°C, 10 ਮਿੰਟ)। ਕਲਚਰ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ (60 ਮਿ.ਲੀ.) ਨੂੰ 10% MeOH/EtOAc ਦੇ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨਾਲ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਜੈਵਿਕ ਪਰਤ ਨੂੰ ਘੱਟ ਦਬਾਅ ਹੇਠ ਭਾਫ਼ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਤਾਂ ਜੋ ਇੱਕ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ (59.5 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ) ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕੇ, ਜਿਸਨੂੰ ਇੱਕ ਰਿਵਰਸ ਫੇਜ਼ ਕਾਲਮ (SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG120, 5 μm, ID 10 mm × ਲੰਬਾਈ 250 mm) 'ਤੇ ਗਰੇਡੀਐਂਟ ਐਲਿਊਸ਼ਨ (0-10 ਮਿੰਟ: 90%) ਨਾਲ HPLC ਦੇ ਅਧੀਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। H2O/CH3CN, 10-35 ਮਿੰਟ: 90% H2O/CH3CN ਤੋਂ 70% H2O/CH3CN (ਗਰੇਡੀਏਂਟ), 35-45 ਮਿੰਟ: 90% H2O/EtOH, 45-155 ਮਿੰਟ: 90% H2O/EtOH ਤੋਂ 100% EtOH (ਗਰੇਡੀਏਂਟ (ਗਰੇਡੀਏਂਟ), 155-200 ਮਿੰਟ: 100% EtOH) 1.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ/ਮਿੰਟ ਦੀ ਪ੍ਰਵਾਹ ਦਰ 'ਤੇ, ਕੂਮਾਮੋਨਾਮਾਈਡ (1, 36.0 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ) ਨੂੰ ਇੱਕ ਚਿੱਟੇ ਅਮੋਰਫਸ ਪਾਊਡਰ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਅਲੱਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਕੁਮਾਮੋਟੋਆਮਾਈਡ(1); 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.93 (t, J = 2.5 Hz, 1H), 6.76 (dd, J = 4.3, 1.8 Hz 1H), 6.05 (t, J = 3.8 Hz, 1H). ), 4.08 (s, 3H); 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ 161.1, 121.0, 119.9, 112.2, 105.0, 68.3; ESI-HRMS [M+H]+: [C6H9N2O2]+ ਗਣਨਾ ਕੀਤਾ ਮੁੱਲ: 141.0659, ਮਾਪਿਆ ਮੁੱਲ: 141.0663, IR νmax 3451, 3414, 3173, 2938, 1603, 1593, 1537 cm–1।
ਕੋਲੰਬੀਆ ਦੇ ਬੀਜ (Col-0) ਖੋਜ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਇਜਾਜ਼ਤ ਨਾਲ Arabidopsis Biological Resource Center (ABRC) ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। Col-0 ਬੀਜਾਂ ਨੂੰ ਸਾਡੀ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਸਾਰਿਤ ਅਤੇ ਸੰਭਾਲਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੇ Arabidopsis ਪੌਦਿਆਂ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। Arabidopsis ਬੀਜਾਂ ਨੂੰ ਸਤ੍ਹਾ 'ਤੇ ਨਿਰਜੀਵ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਅੱਧੇ-ਸ਼ਕਤੀ ਵਾਲੇ ਮੁਰਾਸ਼ੀਗੇ ਅਤੇ ਸਕੂਗ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 2% ਸੁਕਰੋਜ਼ (Fujifilm Wako Pure Chemical), 0.05% (w/v) 2-(4-morpholino) ethanesulfonic acid (MES) (Fujifilm Wako Pure Chemical) ਅਤੇ 1.5% ਅਗਰ (Fujifilm Wako Pure Chemical), pH 5.7, 23 °C ਅਤੇ ਨਿਰੰਤਰ ਰੌਸ਼ਨੀ 'ਤੇ ਸੀ। phs1-1 ਮਿਊਟੈਂਟ ਦੇ ਬੀਜ T. Hashimoto (Nara Institute of Science and Technology) ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।
SR-1 ਸਟ੍ਰੇਨ ਦੇ ਬੀਜ ਟੀ. ਹਾਸ਼ੀਮੋਟੋ (ਨਾਰਾ ਇੰਸਟੀਚਿਊਟ ਆਫ਼ ਸਾਇੰਸ ਐਂਡ ਟੈਕਨਾਲੋਜੀ) ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ ਜੰਗਲੀ ਕਿਸਮ ਦੇ ਤੰਬਾਕੂ ਪੌਦਿਆਂ ਵਜੋਂ ਵਰਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਤੰਬਾਕੂ ਦੇ ਬੀਜਾਂ ਨੂੰ ਸਤ੍ਹਾ 'ਤੇ ਰੋਗਾਣੂ-ਮੁਕਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਉਗਣ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਤਿੰਨ ਰਾਤਾਂ ਲਈ ਰੋਗਾਣੂ-ਮੁਕਤ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਭਿੱਜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਫਿਰ ਇੱਕ ਅੱਧ-ਸ਼ਕਤੀ ਵਾਲੇ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 2% ਸੁਕਰੋਜ਼, 0.05% (w/v) MES, ਅਤੇ 0.8% ਜੈਲਨ ਗਮ (ਫੂਜੀਫਿਲਮ ਵਾਕੋ ਸ਼ੁੱਧ ਰਸਾਇਣਕ) ਮੁਰਾਸ਼ੀਗੇ। ਅਤੇ ਸਕੂਗ ਮਾਧਿਅਮ) pH 5.7 ਦੇ ਨਾਲ ਅਤੇ ਨਿਰੰਤਰ ਰੌਸ਼ਨੀ ਵਿੱਚ 23°C 'ਤੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਸਟ੍ਰੇਨ ਟਾਕ-1 ਟੀ. ਕੋਹਚੀ (ਕਿਓਟੋ ਯੂਨੀਵਰਸਿਟੀ) ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ ਲਿਵਰਵਰਟ ਅਧਿਐਨ ਲਈ ਮਿਆਰੀ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਇਕਾਈ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਜੇਮਾ ਨੂੰ ਨਿਰਜੀਵ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਪੌਦਿਆਂ ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਫਿਰ ਗੈਂਬਰਗ ਬੀ5 ਮਾਧਿਅਮ (ਫੂਜੀਫਿਲਮ ਵਾਕੋ ਸ਼ੁੱਧ ਕੈਮੀਕਲ) 'ਤੇ ਪਲੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 1% ਸੁਕਰੋਜ਼ ਅਤੇ 0.3% ਜੈਲਨ ਗਮ ਸੀ ਅਤੇ ਨਿਰੰਤਰ ਰੌਸ਼ਨੀ ਵਿੱਚ 23°C 'ਤੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਤੰਬਾਕੂ BY-2 ਸੈੱਲ (Nicotiana tabacum L. cv. Bright Yellow 2) S. Hasezawa (ਯੂਨੀਵਰਸਿਟੀ ਆਫ਼ ਟੋਕੀਓ) ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। BY-2 ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਸੋਧੇ ਹੋਏ Linsmeier ਅਤੇ Skoog ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ 95 ਗੁਣਾ ਪਤਲਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਹਫ਼ਤਾਵਾਰੀ 2,4-ਡਾਈਕਲੋਰੋਫੇਨੋਕਸਾਈਸੇਟਿਕ ਐਸਿਡ 32 ਨਾਲ ਪੂਰਕ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸੈੱਲ ਸਸਪੈਂਸ਼ਨ ਨੂੰ ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ 27°C 'ਤੇ 130 rpm 'ਤੇ ਇੱਕ ਰੋਟਰੀ ਸ਼ੇਕਰ 'ਤੇ ਮਿਲਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਤਾਜ਼ੇ ਮਾਧਿਅਮ ਦੇ 10 ਗੁਣਾ ਵਾਲੀਅਮ ਨਾਲ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਧੋਵੋ ਅਤੇ ਉਸੇ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਮੁੜ ਸਸਪੈਂਡ ਕਰੋ। BY-2 ਟ੍ਰਾਂਸਜੈਨਿਕ ਸੈੱਲ ਲਾਈਨਾਂ ਸਥਿਰਤਾ ਨਾਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਮਾਰਕਰ TagRFP-TUA6 ਜਾਂ ਫੁੱਲ ਗੋਭੀ ਮੋਜ਼ੇਕ ਵਾਇਰਸ 35S ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਦੇ ਅਧੀਨ ਐਕਟਿਨ ਫਿਲਾਮੈਂਟ ਮਾਰਕਰ GFP-ABD2 ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀਆਂ ਹਨ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ 33,34,35। ਇਹਨਾਂ ਸੈੱਲ ਲਾਈਨਾਂ ਨੂੰ ਅਸਲ BY-2 ਸੈੱਲ ਲਾਈਨ ਲਈ ਵਰਤੀਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਬਣਾਈ ਰੱਖਿਆ ਅਤੇ ਸਮਕਾਲੀ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
HeLa ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਡੁਲਬੇਕੋ ਦੇ ਸੋਧੇ ਹੋਏ ਈਗਲਜ਼ ਮਾਧਿਅਮ (DMEM) (ਲਾਈਫ ਟੈਕਨਾਲੋਜੀਜ਼) ਵਿੱਚ 10% ਭਰੂਣ ਬੋਵਾਈਨ ਸੀਰਮ, 1.2 U/ml ਪੈਨਿਸਿਲਿਨ, ਅਤੇ 1.2 μg/ml ਸਟ੍ਰੈਪਟੋਮਾਈਸਿਨ ਨਾਲ 5% CO2 ਵਾਲੇ 37°C ਇਨਕਿਊਬੇਟਰ ਵਿੱਚ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਇਸ ਹੱਥ-ਲਿਖਤ ਵਿੱਚ ਦੱਸੇ ਗਏ ਸਾਰੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਜਾਪਾਨੀ ਬਾਇਓਸੁਰੱਖਿਆ ਨਿਯਮਾਂ ਅਤੇ ਦਿਸ਼ਾ-ਨਿਰਦੇਸ਼ਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।
ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਨੂੰ ਡਾਈਮੇਥਾਈਲ ਸਲਫੋਕਸਾਈਡ (DMSO; ਫੁਜੀਫਿਲਮ ਵਾਕੋ ਪਿਊਰ ਕੈਮੀਕਲ) ਵਿੱਚ ਸਟਾਕ ਘੋਲ ਵਜੋਂ ਘੋਲਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਅਰਬੀਡੋਪਸਿਸ ਅਤੇ ਤੰਬਾਕੂ ਲਈ MS ਮਾਧਿਅਮ ਜਾਂ ਲਿਵਰਵਰਟ ਲਈ ਗੈਂਬਰਗ B5 ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਪਤਲਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਜੜ੍ਹਾਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਪਰਖ ਲਈ, ਪ੍ਰਤੀ ਪਲੇਟ 10 ਤੋਂ ਵੱਧ ਬੀਜ ਦਰਸਾਏ ਗਏ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਜਾਂ DMSO ਵਾਲੇ ਅਗਰ ਮਾਧਿਅਮ 'ਤੇ ਬੀਜੇ ਗਏ ਸਨ। ਬੀਜਾਂ ਨੂੰ 7 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਇੱਕ ਵਿਕਾਸ ਚੈਂਬਰ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਬੂਟਿਆਂ ਦੀ ਫੋਟੋ ਖਿੱਚੀ ਗਈ ਸੀ ਅਤੇ ਜੜ੍ਹਾਂ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਮਾਪੀ ਗਈ ਸੀ। ਅਰਬੀਡੋਪਸਿਸ ਉਗਣ ਪਰਖ ਲਈ, ਪ੍ਰਤੀ ਪਲੇਟ 48 ਬੀਜ 200 μM ਮਿਸ਼ਰਣ ਜਾਂ DMSO ਵਾਲੇ ਅਗਰ ਮਾਧਿਅਮ 'ਤੇ ਬੀਜੇ ਗਏ ਸਨ। ਅਰਬੀਡੋਪਸਿਸ ਬੀਜ ਇੱਕ ਵਿਕਾਸ ਚੈਂਬਰ ਵਿੱਚ ਉਗਾਏ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ ਉਗਣ ਵਾਲੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਉਗਣ (ਡੇਗ) ਤੋਂ 7 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ ਗਿਣੀ ਗਈ ਸੀ। ਤੰਬਾਕੂ ਦੇ ਉਗਣ ਪਰਖ ਲਈ, ਪ੍ਰਤੀ ਪਲੇਟ 24 ਬੀਜ 200 μM KAND ਜਾਂ DMSO ਵਾਲੇ ਅਗਰ ਮਾਧਿਅਮ 'ਤੇ ਬੀਜੇ ਗਏ ਸਨ। ਤੰਬਾਕੂ ਦੇ ਬੀਜ ਇੱਕ ਵਿਕਾਸ ਚੈਂਬਰ ਵਿੱਚ ਉਗਾਏ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ ਉਗਣ ਵਾਲੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ 14 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ ਗਿਣੀ ਗਈ ਸੀ। ਲਿਵਰਵਰਟ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ, ਹਰੇਕ ਪਲੇਟ ਤੋਂ 9 ਭਰੂਣਾਂ ਨੂੰ KAND ਜਾਂ DMSO ਦੀ ਦਰਸਾਈ ਗਈ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਾਲੇ ਅਗਰ ਮਾਧਿਅਮ 'ਤੇ ਪਲੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ 14 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਇੱਕ ਵਿਕਾਸ ਚੈਂਬਰ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਰੂਟ ਮੈਰੀਸਟਮ ਸੰਗਠਨ ਦੀ ਕਲਪਨਾ ਕਰਨ ਲਈ 5 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਮਿ.ਲੀ. ਪ੍ਰੋਪੀਡੀਅਮ ਆਇਓਡਾਈਡ (PI) ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਹੋਏ ਬੂਟਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ। ਟੀਸੀਐਸ ਐਸਪੀਈ ਕਨਫੋਕਲ ਲੇਜ਼ਰ ਸਕੈਨਿੰਗ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ (ਲੀਕਾ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਿਸਟਮ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ ਦੁਆਰਾ ਪੀਆਈ ਸਿਗਨਲਾਂ ਨੂੰ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ।
ਮਲਾਮੀ ਅਤੇ ਬੇਨਫੇ36 ਦੁਆਰਾ ਦੱਸੇ ਗਏ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ β-ਗਲੂਕੁਰੋਨੀਡੇਜ਼ (GUS) ਨਾਲ ਜੜ੍ਹਾਂ ਦਾ ਹਿਸਟੋਕੈਮੀਕਲ ਸਟੈਨਿੰਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਬੂਟਿਆਂ ਨੂੰ ਰਾਤੋ-ਰਾਤ 90% ਐਸੀਟੋਨ ਵਿੱਚ ਫਿਕਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, GUS ਬਫਰ ਵਿੱਚ 0.5 mg/ml 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-d-glucuronic ਐਸਿਡ ਨਾਲ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ ਰੰਗਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਇੱਕ ਹਾਈਡਰੇਟਿਡ ਕਲੋਰਾਲਡੀਹਾਈਡ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। (8 ਗ੍ਰਾਮ ਕਲੋਰਲ ਹਾਈਡ੍ਰੇਟ, 2 ml ਪਾਣੀ ਅਤੇ 1 ml ਗਲਿਸਰੋਲ) ਅਤੇ ਐਕਸੀਓ ਇਮੇਜਰ M1 ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ (ਕਾਰਲ ਜ਼ੀਸ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਡਿਫਰੈਂਸ਼ੀਅਲ ਇੰਟਰਫੇਰੈਂਸ ਕੰਟ੍ਰਾਸਟ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ ਦੁਆਰਾ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਖੜ੍ਹੀਆਂ ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਉਗਾਏ ਗਏ 7-ਦਿਨ ਪੁਰਾਣੇ ਬੂਟਿਆਂ 'ਤੇ ਜੜ੍ਹਾਂ ਦੇ ਕੋਣ ਮਾਪੇ ਗਏ। ਕਦਮ 6 ਵਿੱਚ ਦੱਸੇ ਅਨੁਸਾਰ ਗੁਰੂਤਾ ਵੈਕਟਰ ਦੀ ਦਿਸ਼ਾ ਤੋਂ ਜੜ੍ਹ ਦੇ ਕੋਣ ਨੂੰ ਮਾਪੋ।
ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ 37 ਵਿੱਚ ਮਾਮੂਲੀ ਸੋਧਾਂ ਦੇ ਨਾਲ, ਕੋਰਟੀਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲਜ਼ ਦੀ ਵਿਵਸਥਾ ਨੂੰ ਵਰਣਨ ਕੀਤੇ ਅਨੁਸਾਰ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ। ਐਂਟੀ-β-ਟਿਊਬਿਊਲਿਨ ਐਂਟੀਬਾਡੀ (KMX-1, ਮਰਕ ਮਿਲੀਪੋਰ: MAB3408) ਅਤੇ ਅਲੈਕਸਾ ਫਲੋਰ 488-ਕਨਜੁਗੇਟਿਡ ਐਂਟੀ-ਮਾਊਸ IgG (ਥਰਮੋ ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ: A32723) ਨੂੰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ 1:1000 ਅਤੇ 1:100 ਡਾਇਲਿਊਸ਼ਨ 'ਤੇ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਅਤੇ ਸੈਕੰਡਰੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਚਿੱਤਰਾਂ ਨੂੰ TCS SPE ਕਨਫੋਕਲ ਲੇਜ਼ਰ ਸਕੈਨਿੰਗ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ (ਲੀਕਾ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਿਸਟਮ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। Z-ਸਟੈਕ ਚਿੱਤਰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰੋ ਅਤੇ ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੀਆਂ ਹਦਾਇਤਾਂ ਅਨੁਸਾਰ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਤੀਬਰਤਾ ਅਨੁਮਾਨ ਬਣਾਓ।
ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੀਆਂ ਹਦਾਇਤਾਂ ਅਨੁਸਾਰ ਸੈੱਲ ਕਾਊਂਟਿੰਗ ਕਿੱਟ 8 (ਡੋਜਿੰਡੋ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ HeLa ਸੈੱਲ ਪ੍ਰਸਾਰ ਪਰਖ ਕੀਤੀ ਗਈ।
ਈ. ਕੋਲਾਈ DH5α ਦੇ ਵਾਧੇ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ 600 nm (OD600) 'ਤੇ ਇੱਕ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕਲਚਰ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਘਣਤਾ ਨੂੰ ਮਾਪ ਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਟ੍ਰਾਂਸਜੈਨਿਕ BY-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਸਾਇਟੋਸਕੇਲੇਟਲ ਸੰਗਠਨ ਨੂੰ ਇੱਕ CSU-X1 ਕਨਫੋਕਲ ਸਕੈਨਿੰਗ ਡਿਵਾਈਸ (ਯੋਕੋਗਾਵਾ) ਅਤੇ ਇੱਕ sCMOS ਕੈਮਰਾ (ਜ਼ਾਈਲਾ, ਐਂਡੋਰ ਟੈਕਨਾਲੋਜੀ) ਨਾਲ ਲੈਸ ਇੱਕ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ। ਸਾਇਟੋਸਕੇਲੇਟਲ ਘਣਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਚਿੱਤਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਸਨੇ 38,39 ਦੱਸੇ ਅਨੁਸਾਰ ImageJ ਸੌਫਟਵੇਅਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਕਨਫੋਕਲ ਚਿੱਤਰਾਂ ਵਿੱਚ ਸਾਇਟੋਸਕੇਲੇਟਲ ਪਿਕਸਲ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਨੂੰ ਮਾਪਿਆ।
BY-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡੈਥ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ, ਸੈੱਲ ਸਸਪੈਂਸ਼ਨ ਦੇ ਇੱਕ ਐਲੀਕੋਟ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 10 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ 0.05% ਇਵਾਨਸ ਨੀਲੇ ਨਾਲ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਮਰੇ ਹੋਏ ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਚੋਣਵਾਂ ਇਵਾਨਸ ਨੀਲਾ ਧੱਬਾ ਬਰਕਰਾਰ ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਝਿੱਲੀ40 ਦੁਆਰਾ ਵਿਵਹਾਰਕ ਸੈੱਲਾਂ ਤੋਂ ਰੰਗ ਦੇ ਬਾਹਰ ਨਿਕਲਣ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਰੰਗੇ ਹੋਏ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਚਮਕਦਾਰ-ਖੇਤਰ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ (BX53, ਓਲੰਪਸ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ।
HeLa ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ DMEM ਵਿੱਚ 10% FBS ਨਾਲ ਪੂਰਕ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜੋ 37°C 'ਤੇ ਇੱਕ ਨਮੀ ਵਾਲੇ ਇਨਕਿਊਬੇਟਰ ਵਿੱਚ 10% FBS ਅਤੇ 5% CO2 ਨਾਲ ਭਰਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ 100 μM KAND 11, kumamonamic acid 6, kumamonamide 1, 100 ng/ml ਕੋਲਸੇਮਿਡ (Gibco), ਜਾਂ 100 ng/ml ਨੋਕੋਡਮੇਜ਼ (ਸਿਗਮਾ) ਨਾਲ 37°C 'ਤੇ 6 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ MetOH ਨਾਲ 10 ਮਿੰਟ ਲਈ ਅਤੇ ਫਿਰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ ਐਸੀਟੇਟ ਨਾਲ ਫਿਕਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸਥਿਰ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ β-ਟਿਊਬੂਲਿਨ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀ (1D4A4, ਪ੍ਰੋਟੀਨਟੈਕ: 66240-1) ਨਾਲ 0.5% BSA/PBS ਵਿੱਚ 2 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਪਤਲਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, TBST ਨਾਲ 3 ਵਾਰ ਧੋਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਫਿਰ Alexa Fluor ਬੱਕਰੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਨਾਲ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। 488 1 ਘੰਟਾ। – ਮਾਊਸ IgG (ਥਰਮੋ ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ: A11001) ਅਤੇ 15 ng/ml 4′,6-ਡਾਇਮੀਡੀਨੋ-2-ਫੇਨੀਲਿੰਡੋਲ (DAPI) 0.5% BSA/PBS ਵਿੱਚ ਪਤਲਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। TBST ਨਾਲ ਤਿੰਨ ਵਾਰ ਧੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, Nikon Eclipse Ti-E ਇਨਵਰਟਡ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ 'ਤੇ ਦਾਗ਼ ਵਾਲੇ ਸੈੱਲ ਦੇਖੇ ਗਏ। ਚਿੱਤਰਾਂ ਨੂੰ MetaMorph ਸੌਫਟਵੇਅਰ (ਮੌਲੀਕਿਊਲਰ ਡਿਵਾਈਸਿਸ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਇੱਕ ਠੰਢੇ ਹੋਏ Hamamatsu ORCA-R2 CCD ਕੈਮਰੇ ਨਾਲ ਕੈਪਚਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।